詳細介紹
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:
1.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0929 |
名稱 腎實質(zhì)細胞
2.組織來源:腎組織
3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
4.細胞簡介:
人腎實質(zhì)細胞分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細胞生成素、活性D3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進行。腎臟移植是臨床上治療慢性腎功能衰竭的有效方法,然而這種方法受到供體腎短缺的限制。腎細胞移植可部分解決供體腎短缺的問題,是未來可以替代腎臟移植的有效方法。因此,體外腎細胞的培養(yǎng)受到國內(nèi)外有關(guān)專家的密切關(guān)注。原代腎細胞作為一種常用的腎臟毒理學研究對象,其分離方法主要有機械研磨分離法和酶消化法,酶消化法因?qū)毎麚p傷小、分離效果好而優(yōu)于機械研磨分離法;目前常用的酶消化法主要是消化法和膠原酶消化法。
5.方法簡介:
公司實驗室分離的人腎實質(zhì)細胞采用膠原酶-混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
6.質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的人腎實質(zhì)細胞經(jīng)檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
7.培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
使用方法:
收到細胞后,請按照以下方法進行操作。
1. 取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養(yǎng)。
3. 細胞傳代
1) 吸出25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細胞一次;
2) 添加0.125%消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養(yǎng)液終止消化;
3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:2或1:3等適當?shù)谋壤M行接種傳代,然后補充新鮮的*培養(yǎng)基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
4) 待細胞*貼壁后,培養(yǎng)觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
抗凝血酶Ⅲ,10mg/mL1mL OmniMAX2-T1 Phage Resistant 感受態(tài)細胞0.1 mL×10
APMSF 溶液,10mg/mL1mL Oligo(dT) 再生溶液100mL
抑制劑,10mg/mL10mL Oligo(dT) 纖維素25mg
抑氨肽酶,5mg/mL5mL Oligo 快速復性液,10×1mL
鈣蛋白酶抑制劑Ⅰ溶液,10mg/mL10mL Oligo dT12-18 引物,0.5μg/μL5μg
大鼠內(nèi)毒素(Endotoxin)elisa檢測試劑盒
大鼠內(nèi)皮素(ET-1)elisa檢測試劑盒
大鼠內(nèi)皮抑素(ES)elisa檢測試劑盒
大鼠腦鈉素(BNP)elisa檢測試劑盒
大鼠腦鈉肽前體N末端片段 NT-proBNP elisa檢測試劑盒
腎實質(zhì)細胞人P53抗體elisa檢測試劑盒
人PC4,SFRS1互動蛋白1(PSIP1)elisa分析檢測試劑盒
人PC4,SFRS1互動蛋白1(PSIP1)elisa檢測試劑盒免費代測
人PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)elisa分析檢測試劑盒
人PL12抗體/抗丙氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)elisa檢測試劑盒
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