詳細介紹
商品介紹:
THL(EC 3.2.1.28)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應。
測定原理:
采用3.5-二硝基水楊酸法測定THL催化海藻糖產生的還原糖的含量。還原糖與3.5-二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內還原糖的量和反應液的顏色深度成正比,由此判斷THL活性的高低。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
產品名稱:海藻糖酶微量法測試盒
規(guī)格 : 100管/48樣
測試方法: 微量法
貨號:GOY-01S6710
分類:海藻糖系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調節(jié)波長至340nm,蒸餾水調零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本質量,g。
【友情提示】:本產品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
7脫氫膽固醇還原酶抗體 熱休克蛋白70相互作用蛋白抗體
DAP凋亡誘導蛋白激酶2抗體 熱休克蛋白-70抗體
鉀通道蛋白DRK1抗體 熱休克蛋白70抗體
肌相關蛋白DAG1抗體 熱休克蛋白70家族蛋白6抗體
0酸化肌相關蛋白DAG1抗體 熱休克蛋白-60抗體
蛋白上樣緩沖液非還原,5× 10ml
蛋白上樣緩沖液還原,5× 10ml
蛋白示蹤上樣緩沖液非還原,5× 5ml
蛋白示蹤上樣緩沖液還原,5× 5ml
蛋白提取/檢測
海藻糖酶微量法測試盒產氣腸桿菌凍干粉 蘇云金芽胞桿菌多窩亞種 Bacillus thuringiensis subsp. tolwerthi
法氏檸檬酸桿菌 尖鐮孢
耐硼賴酸芽孢桿菌 玫瑰褐鏈霉菌
猴頭菌 糞產堿桿菌 對高分子材料有腐蝕作用,抗藥性能力較強(防腐試驗菌)
淡紫色擬青霉 糞產堿桿菌 產琥珀葡萄糖甙