詳細介紹
商品介紹:
氮素是構(gòu)成生物體的一種必需元素,自然界中的氮素循環(huán)包括許多轉(zhuǎn)化作用??諝庵械牡獨獗还痰⑸锛爸参锱c微生物的共生體固定成氨態(tài)氮,經(jīng)過硝化微生物的作用轉(zhuǎn)化成硝態(tài)氮,后者被植物或微生物同化成有機氮化物,植物組織氨氮含量可反映植物受脅迫的程度。
測定原理
銨態(tài)氮在強堿性介質(zhì)中與次氯酸鹽和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚藍,在625nm處有特征吸收峰,吸光值與銨態(tài)氮含量成正比。
自備實驗用品及儀器
天平、常溫離心機、酶標儀、96孔板、蒸餾水。
產(chǎn)品名稱:植物銨態(tài)氮可見分光光度法測試盒
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法: 可見分光光度法
貨號:GOY-01S6498
分類:氮代謝系列
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測定步驟
1、 分光光度計預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)預熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提?。航ㄗh稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測定葉綠體中FBP酶活性。
建議測定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
FBP活性計算:
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。
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