詳細(xì)介紹
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產(chǎn)品名稱(chēng):硝酸還原酶(NR)(NADH速率法)微量法測(cè)試盒
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法: 微量法
貨號(hào):GOY-01S6477
分類(lèi):氮代謝系列
商品介紹:
NR( EC 1.7.1.3)廣泛存在于植物中,是植物硝態(tài)氮轉(zhuǎn)化為氨態(tài)氮的關(guān)鍵酶,也是誘導(dǎo)酶,對(duì)作物的產(chǎn)量和品質(zhì)有影響。
測(cè)定原理
NR催化硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,NO3ˉ +NADH+H+→ NO2ˉ +NAD+ +H 2 O;NADH在 340 nm 有最大吸收峰,通過(guò)測(cè)定NADH減少速率來(lái)表示NR活性。
需自備的儀器和用品
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液一:液體50mL×1瓶,4℃保存。
提取液二:液體50mL×1瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入40mL試劑四充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑二:液體18μL×1瓶,4℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑三:粉劑×1瓶,-20℃保存;臨用前加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用,用不完的試劑4℃保存;
試劑四:液體50mL×1瓶, 4℃保存;
測(cè)定步驟
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 將試劑一、二、三37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)預(yù)熱10分鐘。
3、 加樣表:
樣本的前處理
①總FBP酶提取:建議稱(chēng)取約0.1g樣本,加入1mL提取液一,冰浴勻漿后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體FBP酶的分離:按照植物組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g樣本,加入1mL提取液一),冰浴勻漿后于4℃,200g離心5min,棄沉淀,取上清在4℃,8000g離心10min,取上清用于測(cè)定胞漿FBP酶活性,取沉淀加1mL提取液二,震蕩溶解后超聲破碎(冰浴,200W,破碎3s,間歇7s,總時(shí)間1min),然后4℃,8000g離心10min,取上清測(cè)定葉綠體中FBP酶活性。
建議測(cè)定總FBP酶活性,按照步驟①提取粗酶液,若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的FBP,則按照步驟②提取粗酶液。
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框25抗體 細(xì)胞周期蛋白SG2N抗體
轉(zhuǎn)錄激活因子MYB抗體 細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體
原癌基因cMAF抗體 細(xì)胞周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體
19號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框46抗體 細(xì)胞周期蛋白G相關(guān)激酶抗體
8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框70抗體 細(xì)胞周期蛋白3抗體
大鼠繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激素(MIS/AMH)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠膜聯(lián)蛋白A5(Annexin A5)elisa檢測(cè)試劑盒
大鼠膜聯(lián)蛋白A5(Annexin A5)elisa檢測(cè)試劑盒
硝酸還原酶(NR)(NADH速率法)微量法測(cè)試盒去離子甲酰胺100mL 間充質(zhì)干細(xì)胞脂防細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
BLOTTO 溶液100mL 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子5mL
酵母 tRNA 溶液 A( 粗提 )1.5mL 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)因子 - 無(wú)血淸5mL
酵母 tRNA 溶液 B( 精提 )1.5mL 間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
Denhardt 溶液,50×100mL 間充質(zhì)干細(xì)胞成骨細(xì)胞分化生長(zhǎng)因子5mL
FBP活性計(jì)算:
(1)按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位的定義:每mg組織蛋白每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=321.5×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計(jì)算
單位的定義:每g組織每分鐘生成1 nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
FBP(nmol/min/g 鮮重)=[ΔA×V反總÷(ε×d)×109]÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.5×ΔA÷W
V反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-3 L;ε:NADPH摩爾消光系數(shù),6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光徑,1cm;V樣:加入樣本體積,0.1 mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應(yīng)時(shí)間,5 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g。