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          脂肪酸代謝 | 甘油三酯檢測(cè)助力酒精性肝病研究

          閱讀:619      發(fā)布時(shí)間:2024-2-20
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          背景介紹

           

          過(guò)量飲酒會(huì)導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激、脂肪堆積和炎癥。隨著酒精性肝病 (ALD) 在全球的流行,ALD的研究迅速增加。目前,許多研究試圖發(fā)現(xiàn)有效治療ALD的藥物,包括使用抗炎、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)腸道微生物群的藥物。

           

          甘油三脂檢測(cè)在ALD研究中的應(yīng)用

           

          肝脂積聚是酒精性肝病的主要病理特征之一。先前的研究表明,二甲雙胍通過(guò)抑制硬脂酰輔酶A脫飽和酶1 (SCD1) 或miR-33b的表達(dá)來(lái)抑制高糖和高胰島素誘導(dǎo)的肝細(xì)胞TG蓄積。還有研究表明,二甲雙胍可以通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)脂肪肝。然而,其在ALD中的作用尚不清楚。

           

          Xie等[1]采用一系列檢測(cè)手段探究了二甲雙胍調(diào)節(jié)酒精性肝病脂代謝的可能機(jī)制。其中甘油三酯 (TG) 檢測(cè)試劑盒(abs580085)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG的濃度,以確定二甲雙胍對(duì)ALD的影響。

           

          甘油三酯檢測(cè)試劑盒使用方法介紹

           

          檢測(cè)原理:

           

          甘油三酯 (TG) ,也稱為三酰甘油三酯或三酰甘油酯,是植物油和動(dòng)物脂肪中的主要成分。在人體內(nèi),血液中甘油三酯的高水平與動(dòng)脈粥樣硬化、心臟病和胰腺炎有關(guān)。試劑盒檢測(cè)原理是利用脂肪酶對(duì)甘油三酯進(jìn)行水解,產(chǎn)生甘油和游離脂肪酸。隨后通過(guò)偶聯(lián)酶促反應(yīng)在500nm下比色讀數(shù),測(cè)定釋放甘油的量,再換算成甘油三酯的含量。

           


          試劑盒組分

          規(guī)格

          儲(chǔ)存條件

          96-Well Microplate

          1 plate

          Diluent

          20 mL × 1

          4 ℃

          Enzyme

          Powder × 1

          -20 ℃

          Dye Reagent

          Powder × 1

          -20 ℃

          Standard (5 mmol/L)

          1 mL × 1

          4 ℃

          Plate Adhesive Strips

          3 Strips

          Technical Manual

          1 Manual




           

          備注:

           

          1、Enzyme:使用前加入9mL Diluent溶解;
          2、Dye Reagent:使用前加入10mL Diluent溶解;
          3、Assay Buffer(未提供):例如制備100mL緩沖液,請(qǐng)將35mL庚烷和65mL異丙醇混合在一起。

           

          操作步驟:

           

          1、試劑和材料

           

          1)自備試劑:Assay Buffer(例如制備100mL緩沖液,請(qǐng)將35mL庚烷和65mL異丙醇混合在一起。)
          2)自備材料:酶標(biāo)儀、蒸餾水、移液器與槍頭、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器等。

           

          2、樣品處理

           

          1)細(xì)胞/細(xì)菌樣品:細(xì)胞/細(xì)菌(5×106個(gè))離心后棄上清,加入1mL緩沖液,超聲處理(功率20%,超聲處理3s,間隔10s,重復(fù)30次)后,4℃、10000g離心10min,取上清轉(zhuǎn)移至新離心管中,置于冰上待檢測(cè);
          2)組織樣品:稱取0.1g組織,加入1mL緩沖液,冰上勻漿后,4℃、10000g離心10min,將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,置于冰上待檢測(cè);

          3)血清/血漿樣品:直接置于冰上待檢測(cè)。

           

          3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

           

          用蒸餾水對(duì)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品(5mmol/L)進(jìn)行2倍連續(xù)稀釋?zhuān)纬蓸?biāo)準(zhǔn)曲線。

           

          4、樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)

           

          對(duì)于未知的樣品,濃度可能在很大的范圍內(nèi)變化。建議多做幾個(gè)稀釋梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),以確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。

           

          5、樣品檢測(cè)

           

          按照以下方式加樣完成后,蓋上板膠帶,混合均勻。將96孔板放入37℃的烘箱中反應(yīng)10min,隨后用酶標(biāo)儀在500nm下檢測(cè)吸光值。

           

          試劑

          樣品孔

          標(biāo)準(zhǔn)品孔

          空白孔

          樣品

          10μL

          標(biāo)準(zhǔn)品

          10μL

          蒸餾水

          10μL

          Enzyme

          90μL

          90μL

          90μL

          Dye Reagent

          100μL

          100μL

          100μL

           









          6、樣品濃度計(jì)算

           

          樣品濃度計(jì)算試劑盒說(shuō)明書(shū)中提供兩種計(jì)算方式:標(biāo)準(zhǔn)曲線法、公式法。

           

          針對(duì)說(shuō)明書(shū)既有計(jì)算公式又有標(biāo)曲的試劑盒,兩種方式任選一種就可以,公式是簡(jiǎn)便算法。建議按照標(biāo)曲計(jì)算,雖然比較麻煩且耗費(fèi)試劑,但檢測(cè)結(jié)果會(huì)更加準(zhǔn)確。按照標(biāo)曲計(jì)算,每一次都需要重新做標(biāo)曲,因?yàn)檫@種反應(yīng)是一個(gè)變化的過(guò)程,檢測(cè)的數(shù)值會(huì)隨著反應(yīng)時(shí)間、溫度等產(chǎn)生變化。


          圖 甘油三酯檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線示例(檢測(cè)限:0.1mmol/L-5mmol/L)

           

          常見(jiàn)問(wèn)題解答

           

          Q1:我想要檢測(cè)肝臟細(xì)胞在處理后,合成甘油三酯的能力是否改變,我的理解是一方面要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯,另一方面也要檢測(cè)細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中的甘油三酯,那么我是不是應(yīng)該把我處理后的細(xì)胞沉淀收取,培養(yǎng)上清也一并保留,這么理解對(duì)嗎?

          A1:理論上是的,既然既要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的又要檢測(cè)分泌出來(lái)的,那肯定是要一并保留上清和細(xì)胞的。

           

          Q2:如果是將細(xì)胞上清收集后檢測(cè),那么按照細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品的檢測(cè)方法,我的培養(yǎng)上清稀釋倍數(shù)是需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定嗎?

          A2:稀釋倍數(shù)都是要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的。

           

          Q3:Enzyme和Dye Reagent都是粉末狀,需要溶解,其中Dye Reagent說(shuō)明書(shū)提示建議現(xiàn)用現(xiàn)配,那我如果想要做預(yù)實(shí)驗(yàn)的話,這兩種試劑溶解后,都能夠放在-80℃保存嗎?

          A3:這樣操作是對(duì)的,特別是酶,溶解后在-80 ℃保存最好。需要注意的是染料不管是低溫還是高溫都會(huì)氧化,建議老師預(yù)實(shí)驗(yàn)做完盡早開(kāi)展實(shí)驗(yàn),一次性多測(cè)些樣品,防止試劑溶解后長(zhǎng)期儲(chǔ)存影響檢測(cè)效果。

           

          Q4:TG試劑盒里面的檢測(cè)板可以拆分嗎?因?yàn)槿绻鲱A(yù)實(shí)驗(yàn)摸索稀釋倍數(shù)的話,可能只做幾個(gè)孔。

          A4:板子不能拆分,但是可以用常規(guī)的96孔酶標(biāo)板替代做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

           

          Q5:該試劑盒可以檢測(cè)組織樣本,對(duì)組織樣本的保存有什么要求嗎?

          A5:沒(méi)有什么特殊要求,新鮮或者液氮速凍的組織都可以。

           


          參考文獻(xiàn)


          [1] Xie F , Zhong Y , Wang D ,et al. Metformin protects against ethanol-induced liver triglyceride accumulation by the LKB1/AMPK/ACC pathway[J].Molecular biology reports, 2022,49(8):7837-7848.

           

          脂肪酸代謝系列試劑盒推薦:


          貨號(hào)

          產(chǎn)品名稱

          規(guī)格

          檢測(cè)范圍

          abs580039

          乙醛脫氫酶檢測(cè)試劑盒

          96T

          4μmol/L - 400μmol/L

          abs580082

          脂肪酶檢測(cè)試劑盒

          96T

          50mmol/L - 500mmol/L

          abs580083

          乙醇脫氫酶檢測(cè)試劑盒

          96T

          4μmol/L - 400μmol/L

          abs580084

          丙酮酸脫羧酶檢測(cè)試劑盒

          96T

          4μmol/L - 400μmol/L

          abs580085

          甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.1mmol/L - 5mmol/L

          abs580112

          高密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.1mmol/L - 10mmol/L

          abs580113

          低密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.1mmol/L - 10mmol/L

          abs580114

          總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.05mmol/L - 5mmol/L

          abs580130

          乙酰輔酶A羧化酶檢測(cè)試劑盒

          96T

          1μmol/L - 100μmol/L

          abs580141

          游離脂肪酸檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.01mmol/L - 1mmol/L

          abs580209

          甘油檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.1mmol/L - 10mmol/L

          abs580213

          乙醇檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.01mg/L - 10mg/L

          abs580217

          脂氧合酶(LOX)檢測(cè)試劑盒

          96T

          0.03mmol/L - 3mmol/L




           

          好消息!Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)!

           


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          WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...

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