背景介紹
過(guò)量飲酒會(huì)導(dǎo)致肝臟氧化應(yīng)激、脂肪堆積和炎癥。隨著酒精性肝病 (ALD) 在全球的流行,ALD的研究迅速增加。目前,許多研究試圖發(fā)現(xiàn)有效治療ALD的藥物,包括使用抗炎、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)腸道微生物群的藥物。
甘油三脂檢測(cè)在ALD研究中的應(yīng)用
肝脂積聚是酒精性肝病的主要病理特征之一。先前的研究表明,二甲雙胍通過(guò)抑制硬脂酰輔酶A脫飽和酶1 (SCD1) 或miR-33b的表達(dá)來(lái)抑制高糖和高胰島素誘導(dǎo)的肝細(xì)胞TG蓄積。還有研究表明,二甲雙胍可以通過(guò)激活A(yù)MPK信號(hào)通路逆轉(zhuǎn)脂肪肝。然而,其在ALD中的作用尚不清楚。
Xie等[1]采用一系列檢測(cè)手段探究了二甲雙胍調(diào)節(jié)酒精性肝病脂代謝的可能機(jī)制。其中甘油三酯 (TG) 檢測(cè)試劑盒(abs580085)用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TG的濃度,以確定二甲雙胍對(duì)ALD的影響。
甘油三酯檢測(cè)試劑盒使用方法介紹
檢測(cè)原理:
甘油三酯 (TG) ,也稱為三酰甘油三酯或三酰甘油酯,是植物油和動(dòng)物脂肪中的主要成分。在人體內(nèi),血液中甘油三酯的高水平與動(dòng)脈粥樣硬化、心臟病和胰腺炎有關(guān)。試劑盒檢測(cè)原理是利用脂肪酶對(duì)甘油三酯進(jìn)行水解,產(chǎn)生甘油和游離脂肪酸。隨后通過(guò)偶聯(lián)酶促反應(yīng)在500nm下比色讀數(shù),測(cè)定釋放甘油的量,再換算成甘油三酯的含量。
試劑盒組分 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 |
96-Well Microplate | 1 plate | — |
Diluent | 20 mL × 1 | 4 ℃ |
Enzyme | Powder × 1 | -20 ℃ |
Dye Reagent | Powder × 1 | -20 ℃ |
Standard (5 mmol/L) | 1 mL × 1 | 4 ℃ |
Plate Adhesive Strips | 3 Strips | — |
Technical Manual | 1 Manual | — |
備注:
1、Enzyme:使用前加入9mL Diluent溶解;
2、Dye Reagent:使用前加入10mL Diluent溶解;
3、Assay Buffer(未提供):例如制備100mL緩沖液,請(qǐng)將35mL庚烷和65mL異丙醇混合在一起。
操作步驟:
1、試劑和材料
1)自備試劑:Assay Buffer(例如制備100mL緩沖液,請(qǐng)將35mL庚烷和65mL異丙醇混合在一起。)
2)自備材料:酶標(biāo)儀、蒸餾水、移液器與槍頭、離心機(jī)、計(jì)時(shí)器等。
2、樣品處理
1)細(xì)胞/細(xì)菌樣品:細(xì)胞/細(xì)菌(5×106個(gè))離心后棄上清,加入1mL緩沖液,超聲處理(功率20%,超聲處理3s,間隔10s,重復(fù)30次)后,4℃、10000g離心10min,取上清轉(zhuǎn)移至新離心管中,置于冰上待檢測(cè);
2)組織樣品:稱取0.1g組織,加入1mL緩沖液,冰上勻漿后,4℃、10000g離心10min,將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,置于冰上待檢測(cè);
3)血清/血漿樣品:直接置于冰上待檢測(cè)。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線制備
用蒸餾水對(duì)試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品(5mmol/L)進(jìn)行2倍連續(xù)稀釋?zhuān)纬蓸?biāo)準(zhǔn)曲線。
4、樣品預(yù)實(shí)驗(yàn)
對(duì)于未知的樣品,濃度可能在很大的范圍內(nèi)變化。建議多做幾個(gè)稀釋梯度進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),以確保讀數(shù)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍內(nèi)。
5、樣品檢測(cè)
按照以下方式加樣完成后,蓋上板膠帶,混合均勻。將96孔板放入37℃的烘箱中反應(yīng)10min,隨后用酶標(biāo)儀在500nm下檢測(cè)吸光值。
試劑 | 樣品孔 | 標(biāo)準(zhǔn)品孔 | 空白孔 |
樣品 | 10μL | — | — |
標(biāo)準(zhǔn)品 | — | 10μL | — |
蒸餾水 | — | — | 10μL |
Enzyme | 90μL | 90μL | 90μL |
Dye Reagent | 100μL | 100μL | 100μL |
6、樣品濃度計(jì)算
樣品濃度計(jì)算試劑盒說(shuō)明書(shū)中提供兩種計(jì)算方式:標(biāo)準(zhǔn)曲線法、公式法。
針對(duì)說(shuō)明書(shū)既有計(jì)算公式又有標(biāo)曲的試劑盒,兩種方式任選一種就可以,公式是簡(jiǎn)便算法。建議按照標(biāo)曲計(jì)算,雖然比較麻煩且耗費(fèi)試劑,但檢測(cè)結(jié)果會(huì)更加準(zhǔn)確。按照標(biāo)曲計(jì)算,每一次都需要重新做標(biāo)曲,因?yàn)檫@種反應(yīng)是一個(gè)變化的過(guò)程,檢測(cè)的數(shù)值會(huì)隨著反應(yīng)時(shí)間、溫度等產(chǎn)生變化。
圖 甘油三酯檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線示例(檢測(cè)限:0.1mmol/L-5mmol/L)
常見(jiàn)問(wèn)題解答
Q1:我想要檢測(cè)肝臟細(xì)胞在處理后,合成甘油三酯的能力是否改變,我的理解是一方面要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的甘油三酯,另一方面也要檢測(cè)細(xì)胞分泌到培養(yǎng)液中的甘油三酯,那么我是不是應(yīng)該把我處理后的細(xì)胞沉淀收取,培養(yǎng)上清也一并保留,這么理解對(duì)嗎?
A1:理論上是的,既然既要檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的又要檢測(cè)分泌出來(lái)的,那肯定是要一并保留上清和細(xì)胞的。
Q2:如果是將細(xì)胞上清收集后檢測(cè),那么按照細(xì)胞培養(yǎng)上清樣品的檢測(cè)方法,我的培養(yǎng)上清稀釋倍數(shù)是需要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定嗎?
A2:稀釋倍數(shù)都是要通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定的。
Q3:Enzyme和Dye Reagent都是粉末狀,需要溶解,其中Dye Reagent說(shuō)明書(shū)提示建議現(xiàn)用現(xiàn)配,那我如果想要做預(yù)實(shí)驗(yàn)的話,這兩種試劑溶解后,都能夠放在-80℃保存嗎?
A3:這樣操作是對(duì)的,特別是酶,溶解后在-80 ℃保存最好。需要注意的是染料不管是低溫還是高溫都會(huì)氧化,建議老師預(yù)實(shí)驗(yàn)做完盡早開(kāi)展實(shí)驗(yàn),一次性多測(cè)些樣品,防止試劑溶解后長(zhǎng)期儲(chǔ)存影響檢測(cè)效果。
Q4:TG試劑盒里面的檢測(cè)板可以拆分嗎?因?yàn)槿绻鲱A(yù)實(shí)驗(yàn)摸索稀釋倍數(shù)的話,可能只做幾個(gè)孔。
A4:板子不能拆分,但是可以用常規(guī)的96孔酶標(biāo)板替代做預(yù)實(shí)驗(yàn)。
Q5:該試劑盒可以檢測(cè)組織樣本,對(duì)組織樣本的保存有什么要求嗎?
A5:沒(méi)有什么特殊要求,新鮮或者液氮速凍的組織都可以。
參考文獻(xiàn)
[1] Xie F , Zhong Y , Wang D ,et al. Metformin protects against ethanol-induced liver triglyceride accumulation by the LKB1/AMPK/ACC pathway[J].Molecular biology reports, 2022,49(8):7837-7848.
脂肪酸代謝系列試劑盒推薦:
貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)范圍 |
abs580039 | 乙醛脫氫酶檢測(cè)試劑盒 | 96T | 4μmol/L - 400μmol/L |
abs580082 | 脂肪酶檢測(cè)試劑盒 | 96T | 50mmol/L - 500mmol/L |
abs580083 | 乙醇脫氫酶檢測(cè)試劑盒 | 96T | 4μmol/L - 400μmol/L |
abs580084 | 丙酮酸脫羧酶檢測(cè)試劑盒 | 96T | 4μmol/L - 400μmol/L |
abs580085 | 甘油三酯(TG)檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.1mmol/L - 5mmol/L |
abs580112 | 高密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.1mmol/L - 10mmol/L |
abs580113 | 低密度脂蛋白檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.1mmol/L - 10mmol/L |
abs580114 | 總膽固醇(TC)檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.05mmol/L - 5mmol/L |
abs580130 | 乙酰輔酶A羧化酶檢測(cè)試劑盒 | 96T | 1μmol/L - 100μmol/L |
abs580141 | 游離脂肪酸檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.01mmol/L - 1mmol/L |
abs580209 | 甘油檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.1mmol/L - 10mmol/L |
abs580213 | 乙醇檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.01mg/L - 10mg/L |
abs580217 | 脂氧合酶(LOX)檢測(cè)試劑盒 | 96T | 0.03mmol/L - 3mmol/L |
好消息!Absin文獻(xiàn)獎(jiǎng)勵(lì)重磅升級(jí)!
Absin特色產(chǎn)品線:
WB相關(guān):ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠;IHC相關(guān):二抗試劑盒、組化筆;IP/CoIP試劑盒;激動(dòng)劑/抑制劑;血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE;凋亡試劑盒;呼吸爆發(fā)試劑盒;ELISA試劑盒;重組蛋白;抗體: 二抗、標(biāo)簽抗體、對(duì)照抗體;定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測(cè))...
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