黄色视频不卡_午夜福利免费观看在线_亚洲国产精品999在线_欧美绝顶高潮抽搐喷水_久久精品成人免费网站_晚上一个人看的免费电影_国产又色又爽无遮挡免费看_成人国产av品久久久

    1. <dd id="lgp98"></dd>
      • <dd id="lgp98"></dd>
        1. 您好, 歡迎來到化工儀器網(wǎng)

          | 注冊| 產(chǎn)品展廳| 收藏該商鋪

          021-38015121

          technology

          首頁   >>   技術(shù)文章   >>   免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之后續(xù)研究

          愛必信(上海)生物科技有...

          立即詢價(jià)

          您提交后,專屬客服將第一時(shí)間為您服務(wù)

          免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之后續(xù)研究

          閱讀:262      發(fā)布時(shí)間:2024-10-15
          分享:

          概述

           

          免疫細(xì)胞培養(yǎng)的六個(gè)基本流程:樣本制備、細(xì)胞分選、分型鑒定、擴(kuò)增&培養(yǎng)、質(zhì)量優(yōu)化、后續(xù)研究。小愛已經(jīng)給大家詳細(xì)介紹了《免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之樣本制備(一)》、《免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之細(xì)胞分選(二)》、《免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之分型鑒定(三)》、《免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之擴(kuò)增&培養(yǎng)(四)》、《免疫細(xì)胞培養(yǎng)攻略之質(zhì)量優(yōu)化(五)》今天我們繼續(xù)來了解一下后續(xù)研究。

           

          后續(xù)研究(Follow-Up Study):運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、細(xì)胞共培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)技術(shù)研究免疫細(xì)胞的功能(殺傷能力、分泌細(xì)胞因子、吞噬功能、增殖能力等)。免疫細(xì)胞可以做的后續(xù)研究實(shí)在是太多了,比如:CAR-T/NK/M,腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞共培養(yǎng)、類器官免疫共培養(yǎng),細(xì)胞因子風(fēng)暴等等,小愛在這里拋磚引玉,給大家介紹3個(gè)免疫細(xì)胞研究的熱門思路:NK細(xì)胞殺傷能力鑒定、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)、Treg體外抑制實(shí)驗(yàn)。

           

          NK細(xì)胞殺傷能力鑒定

           

          NK作為自帶免疫記憶的自然殺傷細(xì)胞,對其殺傷功能的研究也是十分火熱。

           

          NK細(xì)胞主要通過以下四個(gè)途徑殺傷靶細(xì)胞:

          ①NK細(xì)胞脫顆粒,釋放穿孔素和顆粒酶殺傷靶細(xì)胞;

          ②活化的NK細(xì)胞通過釋放細(xì)胞因子來殺傷靶細(xì)胞;

          ③通過死亡受體如Fas/FasL和TNF-α/TNFR-1途徑誘導(dǎo)靶細(xì)胞凋亡;

          ④介導(dǎo)ADCC作用殺傷靶細(xì)胞[1]。

           

          圖1 NK細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞的四種途徑

           

          體外研究NK細(xì)胞殺傷功能主要是將NK細(xì)胞與靶細(xì)胞(通常是K562細(xì)胞)共培養(yǎng),然后通過檢測靶細(xì)胞釋放的酶或者用CAM、CFSE標(biāo)記靶細(xì)胞,通過檢測熒光,也可以通過MTT/CCK8檢測細(xì)胞數(shù)量,從而得出NK細(xì)胞的殺傷活性,也可以檢測NK細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子或者脫顆粒指標(biāo)CD107a。當(dāng)然我們可以換成其他的免疫細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。

           

          小愛也給大家整理了步驟可以參考:

          1、將用熒光染料GFP,CFSE標(biāo)記的靶細(xì)胞(一般為腫瘤細(xì)胞)接種到96孔板中,不同腫瘤細(xì)胞的接種密度可以參考圖2;

           

          圖2 用于NK和腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)中不同腫瘤細(xì)胞的接種密度

           

          2、第二天,將培養(yǎng)基更換成NK細(xì)胞的培養(yǎng)體系,并按照靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞(NK)1:3的比例加入NK細(xì)胞,0-12h分別進(jìn)行熒光顯微鏡拍照;

          注意:靶細(xì)胞和效應(yīng)細(xì)胞的共培養(yǎng)比例以及時(shí)間均需要通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定。

           

          圖3 不同上皮細(xì)胞系在與NK共培養(yǎng)中的累積存活曲線

           

          表1 腫瘤免疫共培養(yǎng)表格


          名稱

          貨號

          應(yīng)用

          人自然殺傷細(xì)胞(NK)擴(kuò)增試劑盒

          abs9824

          NK細(xì)胞培養(yǎng)

          Recombinant Human IL-15 Protein

          abs00818

          細(xì)胞因子(國產(chǎn)高性價(jià)比)

          Recombinant Human IL-2 Protein

          abs00804




           

          混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)

           

          混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Mixed Lymphocyte Reaction, MLR)也稱作混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng),是指在抗原提呈細(xì)胞刺激下,T細(xì)胞發(fā)生增殖和活化,根據(jù)淋巴細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)度來評價(jià)組織相容性抗原差異和對異體細(xì)胞的反應(yīng)能力??梢苑譃?strong>雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)、單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)。體外研究中,通常也會檢測T細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子如IFN-γ、T細(xì)胞增殖抗原CD107a。

           

          雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng):將來自兩個(gè)不同供體的 PBMC 共培養(yǎng),使來自兩個(gè)供體的T細(xì)胞發(fā)生雙向活化。

          單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng):將從一個(gè)供體分離的 CD4+T細(xì)胞與從另一個(gè)供體分離的DC相結(jié)合,從而使 T 細(xì)胞發(fā)生單向活化。

           

          圖4 單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)體外研究示意圖

           

          小愛以單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)為例給大家介紹實(shí)驗(yàn)步驟:

          1、用50μg/mL的絲lie霉素37℃處理來自供體B的PBMCs 30min,這些細(xì)胞作為刺激細(xì)胞;

          2、300×g離心5min,去除絲lie霉素,按照2x106個(gè)PBMCs/mL(或者磁珠分選出DC細(xì)胞)接種到24孔板(250uL)中;

          3、再加入250uL來自供A的個(gè)PBMCs(2x106cells/mL)(或者磁珠分選出T細(xì)胞),作為應(yīng)答細(xì)胞;

          4、將刺激細(xì)胞和應(yīng)答細(xì)胞構(gòu)成的MLR置于37℃,5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)七天;

          5、7天后可以檢測應(yīng)答細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子的分泌情況。

           

          表2 腫瘤免疫共培養(yǎng)表格


          名稱

          貨號

          應(yīng)用

          人淋巴細(xì)胞分離液

          abs930

          獲得PBMCs

          CD3/CD28磁珠

          abs160019

          分選T細(xì)胞




           

          CD4+CD25+Treg和CD8+T體外抑制實(shí)驗(yàn)

           

          體外抑制實(shí)驗(yàn)的優(yōu)勢在于,因?yàn)橹挥蠺resp細(xì)胞(CD4+CD25-)或Treg細(xì)胞與免疫細(xì)胞共培養(yǎng),所以可以直接評估Treg細(xì)胞對CD8+T細(xì)胞反應(yīng)的抑制作用。除CD8+T細(xì)胞外,也可以通過改變實(shí)驗(yàn)條件來評估Treg細(xì)胞對其它免疫細(xì)胞(如樹突狀細(xì)胞或自然殺傷細(xì)胞)的影響。

           

          小愛也給大家整理了文獻(xiàn)中的實(shí)驗(yàn)步驟,可以作為參考:

           

          1、CD3/CD28磁珠的清洗:

          1)在離心管里重懸磁珠(渦旋超過30s,或者顛倒混勻5min);

          2)將確定體積的磁珠轉(zhuǎn)移到離心管中;

          3)加入等體積的PBS緩沖液含1%的HSA,或者至少1ml的體積,進(jìn)行重懸;

          4)把離心管放在磁力架(磁珠專用)上1min,隨后棄去上清;

          5)將離心管從磁力架(磁珠專用)上轉(zhuǎn)移下來,用相同體積的PBS緩沖液含1%的HSA重懸磁珠(第二步最初體積的磁珠)。

          2、取50μL CD4+CD25+Treg細(xì)胞(1×105cells/孔)。每孔加50μL CD8+T細(xì)胞作為應(yīng)答T (Tresp)細(xì)胞(1×105cells/孔)。每孔加入已經(jīng)洗過的CD3/CD28磁珠,磁珠和細(xì)胞的比例調(diào)整為1:1 。

          注意:在此步驟中,標(biāo)記和建立對照孔如下:未刺激CD8+T(不含anti-CD3/CD28);刺激的CD8+T細(xì)胞(含anti-CD3/CD28);刺激的Treg細(xì)胞(含anti-CD3/CD28)。Treg細(xì)胞可以用wan全培養(yǎng)基稀釋,以不同比例的Tresp細(xì)胞與Treg細(xì)胞(1:0.25-1:1)共培養(yǎng);

          3、各孔加50μL或適當(dāng)體積的培養(yǎng)基,總體積為200μL。用鋁箔蓋住板子,放入二氧化碳培養(yǎng)箱中37°C培養(yǎng)72h;

          4、培養(yǎng)72h后進(jìn)行細(xì)胞因子產(chǎn)生分析,將每孔上清液分離到另一個(gè)板上,進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),檢測IFN-γ水平;

          5、將每孔上清液分離后,用FACS緩沖液清洗含有細(xì)胞的培養(yǎng)皿,4°C,300g離心2min,洗3次;

          6、洗滌后,棄去上清。用50μL的抗體緩沖液(anti-CD4、anti-CD8和細(xì)胞活力檢測試劑)重懸細(xì)胞,對增殖的CD8+T細(xì)胞進(jìn)行染色(在獲得CD8+T細(xì)胞時(shí),可使用追蹤細(xì)胞增殖的染料進(jìn)行標(biāo)記)。4°C避光孵育20min;

          7、4°C,300g離心2min,洗兩次。洗滌后,棄上清,用100μL固定緩沖液4℃避光固定20min;

          8、4°C,300g離心2min,洗兩次。200μL FACS緩沖液重懸細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測標(biāo)記CD8+T細(xì)胞增殖情況。

           

          圖6 活化的Treg細(xì)胞抑制CD8+T細(xì)胞的增殖以及分泌IFN-γ

           


          名稱

          貨號

          應(yīng)用

          人T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基

          abs9823

          Human T細(xì)胞活化擴(kuò)增試劑盒(微米級磁珠)




           

          今天講解就到這了,大家如有細(xì)胞培養(yǎng)問題,歡迎一起交流哦!

            

          本期小愛推薦


          貨號

          品名

          規(guī)格

          abs9824

          人自然殺傷細(xì)胞(NK)擴(kuò)增試劑盒

          1kit

          abs00818

          Recombinant Human IL-15 Protein

          10ug/50ug/100ug/500ug

          abs00804

          Recombinant Human IL-2 Protein

          10ug/500ug

          abs930

          人淋巴細(xì)胞分離液

          200mL/200mL×10

          abs160019

          CD3/CD28磁珠

          1mL

          abs9823

          人T細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)基

          1kit




           

          Absin產(chǎn)品線:

          爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

          特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

          會員登錄

          請輸入賬號

          請輸入密碼

          =

          請輸驗(yàn)證碼

          收藏該商鋪

          標(biāo)簽:
          保存成功

          (空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

          常用:

          提示

          您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
          在線留言
          洪江市| 湄潭县| 南宫市| 离岛区| 云南省| 珠海市| 苗栗市| 阿瓦提县| 昌图县| 龙山县| 嘉荫县| 涞水县| 辽中县| 尤溪县| 历史| 苍山县| 鸡东县| 贞丰县| 正定县| 黔西县| 芮城县| 新巴尔虎左旗| 明水县| 新乐市| 荥经县| 花垣县| 平乡县| 镇平县| 屯门区| 南平市| 沐川县| 阿勒泰市| 宜春市| 宜州市| 呈贡县| 大理市| 禹州市| 庆城县| 扶绥县| 新安县| 昌江|