目錄:愛必信（上海）生物科技有限公司>>細胞生物學(xué)>>細胞檢測>> abs9588支原體檢測試劑盒(PCR法)
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50T |
|---|---|---|---|
| 貨號 | abs9588 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),制藥 |
描述：
支原體污染會對細胞各個方面都造成不良影響，已經(jīng)成為細胞培養(yǎng)中高度重視的問題，因此，定期進行支原體污染檢測是十分必要的。本支原體檢測試劑盒是采用PCR方法，特異性的檢測各種培養(yǎng)細胞生物材料（如細胞培養(yǎng)物、實驗動物分泌物、動物血清等）中支原體的污染。
試劑盒使用的混合引物是針對支原體16s rRNA序列的保守區(qū)域設(shè)計的特異性引物，可直接使用細胞培養(yǎng)液作為PCR模板，特異性擴增支原體DNA，搭配配套的Mycoplasma PCR Mix（2×）一小時內(nèi)即可完成，本試劑盒檢測靈敏度高，可檢測低至20個拷貝的支原體。
使用方法：
1、樣品準備：取適量待檢細胞培養(yǎng)上清于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板。血清樣本可利用Mycoplasma Free Water稀釋后，取適量樣本于潔凈的PCR管中，利用PCR儀95℃熱處理5 min后作為模板；
2、PCR體系配制：每次實驗需設(shè)置陰性對照（將1 μL待檢樣品換成等量的Mycoplasma Free Water）與陽性對照（在1 μL待檢樣品中加入0.5 μL Positive Control后一起作為Template），實驗時戴一次性口罩與手套，謹慎操作，防止操作不當引入外源支原體污染；
| 組分 | 體積 |
| Template | 1ul |
| Mycoplasma Primer Mix | 2ul |
| Mycoplasma PCR Mix（2×） | 10ul |
| Mycoplasma Free Water | To 20ul |
3、PCR程序設(shè)置：
| Step | Temperature | Time | Cycles |
| Initial Denaturation | 98℃ | 2 min | 1 |
| Denaturation | 98℃ | 20 S | 30 |
| Annealing | 56℃ | 25 S | |
| Extension | 72℃ | 10 S | |
| Final extension | 72℃ | 5 min | 1 |
| Hold | 4-16℃ | Forever |
4、凝膠電泳：取10 μL PCR產(chǎn)物，使用1%瓊脂糖凝膠進行電泳檢測；
5、結(jié)果分析：每次實驗通過與陰性對照、陽性對照檢測結(jié)果比較確認樣品支原體污染情況，陽性條帶大小500 bp左右。如陰性對照檢測結(jié)果中有條帶很有可能是PCR體系中出現(xiàn)污染，建議重新實驗確認結(jié)果。如有必要，也可對PCR產(chǎn)物進行常規(guī)測序，以確定具體的支原體種屬。
注意事項：
1、本試劑盒可以檢測M.orale，M.arginini，M.bovis，M.fermentans，M.gallisepticum，M.hominis，M.pirum，Ureaplasma spp，M.hyorhinis，M.pneumoniae，A.laidlawii等至少11種以上支原體污染。
2、所有試劑在使用前于冰上解凍好、混勻，使用完畢后于-20℃保存。
3、每次實驗必須設(shè)置陰性對照、陽性對照，實驗組建議設(shè)置樣品模板梯度。
4、操作時必須佩戴口罩，嚴格按照PCR操作標準，防止引入外源污染影響實驗結(jié)果。
5、為了確保細胞實驗的可靠性及穩(wěn)定性，建議定期進行支原體污染檢測。
6、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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