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上海谷研實業(yè)有限公司 |
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| 參考價 | 面議 |
更新時間：2022-04-06 14:19:20瀏覽次數(shù)：279
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | GOY-01X0277 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 產(chǎn)品僅供科研使用 |
冷凍保存細胞之方法？
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘*） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
產(chǎn)品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
| UMNSAH/DF-1 (雞胚成纖維細胞) | 1×10?cells/T25培養(yǎng)瓶 | GOY-01X0277 |
商品介紹：
名稱 UMNSAH/DF-1 (雞胚成纖維細胞) 別稱UMNSAH-DF-1; UMNSAH-DF 1; UMNSAH-DF1; UMNSAH/DF#1; DF-1; DF1; Douglas Foster-1 種屬家雞 年齡（性別）10日齡 組織來源胚胎，自發(fā)永生化 生長特性貼壁細胞 細胞形態(tài)成纖維細胞樣 背景描述UMNSAH/DF-1細胞是起源于10日齡的ELL-0雞蛋的雞細胞株，自發(fā)永生化。分離原代雞胚成纖維細胞并在培養(yǎng)液中培養(yǎng)，傳代直到衰老；在衰老過程中離心以保持細胞培養(yǎng)在30%到60%滿；不衰老的克隆進行鑒定并傳代不少于30次。在軟瓊脂上沒有觀察到克隆增殖，說明UMNSAH/DF-1細胞是永生化而沒有轉(zhuǎn)化。UMNSAH/DF-1細胞可作為病毒增殖、重組蛋白表達和重組病毒的基質(zhì)。 生物安全等級1 生長培養(yǎng)基DMEM＋10% FBS＋1% P/S 推薦傳代比例1:3-1:4 推薦換液頻率2~3次/周 倍增時間~22-36小時 凍存條件 凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO 溫度：液氮 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：39℃（Max.40℃，Min.38℃） 致瘤性No, in immunosuppressed mice. No, in semisolid medium. 注意事項1、該細胞培養(yǎng)難度較高，溫度波動會導(dǎo)致細胞空泡增多； 2、該細胞為38℃~40℃培養(yǎng)，最佳培養(yǎng)溫度為39℃，37℃培養(yǎng)會影響細胞狀態(tài)，建議提前準備專用培養(yǎng)箱； 3、受溫度波動影響，收貨常見細胞空泡較多，穩(wěn)定培養(yǎng)后可恢復(fù)。 |
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，將成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
牛甘油醛-3-脫氫(GAPDH)免疫試劑盒進口、分裝
凋亡相關(guān)半胱肽4(Casp4)免疫試劑盒進口、組裝
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小鼠微管蛋白β3(TUBB3)免疫試劑盒*直銷
UMNSAH/DF-1 (雞胚成纖維細胞)1mL 亮抑蛋白肽溶液，10 mg/mL Leupeptin Solution 4℃保存一周，-20℃保存6個月
2 ug pUC118 pUC118 低溫運輸，-20℃保存
24次 凋亡DNAout Apoptotic DNAOUT -20℃保存
2 ug p3×FLAG-CMV-14 p3×FLAG-CMV-14 低溫運輸，-20℃保存
含糖牛肉湯培養(yǎng)基 Beef Broth Medium(with Sugar) 250g
100g 三 ( 羥甲基 ) 氨基甲烷鹽酸鹽 TRIS-HCl(Tris（Hydroxymethyl）Aminomethane Hydrochloride) 室溫干燥保存
50T 豬鏈球菌基因分型PCR檢測試劑盒 低溫運輸，-20℃保存
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