以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Glecaprevir是一種新型的HCV NS3/4A蛋白酶(HCV NS3/4A protease)抑制劑,其IC50值在3.5和11.3nM之間。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1365970-03-1 別名:ABT-493 純度:99.65% 分子量:838.87 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時(shí)內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
異鼠李-3-O-葡萄糖-7-O-鼠李糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Terfenadine磷化NIFK抗體包裝1g
異鼠李-3-O-葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sodium ascorbate磷化NIFK抗體包裝5g
異鼠李-3-O-新橙皮苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Thiamine nitrateNCKAP5蛋白抗體包裝100g
異飛薊賓英文名稱: alpha-Asarone一氧化氮合轉(zhuǎn)運(yùn)誘導(dǎo)抗體包裝25g
異土木香內(nèi)酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dioxopromethazine hydrochloride中性鞘磷脂相關(guān)因子抗體包裝5g
異夏佛塔苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ganoderal A人白介3介導(dǎo)核因子抗體包裝1mg
異型南五味子?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: AstemizoleSH2結(jié)構(gòu)域蛋白3A抗體包裝5MG
異櫻花;異櫻花亭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Eltrombopag (SB-497115)轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體包裝25g
異澤蘭黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CapsazepineNPIP樣蛋白1抗體包裝5g
異紫花前胡內(nèi)酯英文名稱: Amiloride hydrochloride 老年性癡呆蛋白APH2抗體包裝1g
益母草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Amiloride hydrochloride 神經(jīng)凋亡調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)化蛋白1抗體(前蛋白轉(zhuǎn)化枯草溶菌9)包裝100g
益智(益智仁)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Methyl 3,5-diamino-6-chloropyrazine-2-carboxylateG蛋白偶聯(lián)受體147抗體包裝25g
益智(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Pizotifen孤兒核受體蛋白Nur77抗體包裝5g
薏苡仁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: β-Cyclodextrin磷化孤兒核受體蛋白Nur77抗體包裝5g
薏苡仁油(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Captopril Disulfide核凋亡誘導(dǎo)因子蛋白1包裝1g
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品間α-抑制因子重鏈H1試劑盒朝藿定A;Epimedin A
: 3,15資源名稱: 托馬斯維爾沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,進(jìn)分間-alpha-抑制劑重鏈H4試劑盒朝藿定B;Epmedin B
: ivcas7.01049資源名稱: 蘇云金芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,II晶型假定蛋白LOC677168 ELISA Kit朝藿定C;Epmedin C
HCV NS3/4A蛋白酶抑制劑(Glecaprevir)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因GDIA1抗體木蘭花(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Ethyl-1-hexanol
腫瘤轉(zhuǎn)移抑制因GDIA2抗體木蘭花(標(biāo)準(zhǔn)品) 2-Ethyl-1,3-hexanediol
胰高血糖抗體木蘭脂(標(biāo)準(zhǔn)品) Mesotrione
線粒體甘油3磷酰轉(zhuǎn)移抗體木棉花(標(biāo)準(zhǔn)品) Methyl decanoate
磷脂酰蛋白聚糖-6抗體木栓(標(biāo)準(zhǔn)品) Methyl laurate
磷二羥酰轉(zhuǎn)移抗體木通乙苷B;荷苞花苷B Triticonazole
囊性組織液體蛋白15抗體木犀草苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Tsumacide solution
磷化接頭蛋白Gab2抗體木犀草-7-O-葡萄糖苷 Triforin
通用轉(zhuǎn)錄因子2H肽1抗體木犀草(標(biāo)準(zhǔn)品) Triazophos