商品介紹:
PF429242dihydrochloride是可逆的,競爭性的S1P抑制劑,IC50值為175nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 純度:98.76% 分子量:482.49 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
芥子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Neostigmine bromideLRRC59蛋白抗體包裝25g
芥子堿英文名稱: MagnolinLRRC41蛋白抗體包裝500g
芥子堿硫鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Racanisodamine促黃體生成受體抗體包裝100ml
金合歡;槐(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadimethoxine sodium salt乳清蛋白α抗體包裝25ml
金蓮花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sulfadimethoxine sodium salt核纖層蛋白B2抗體包裝500ml
金毛耳草(黃毛耳草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Digitoxigenin層粘蛋白α5抗體包裝1g
金錢草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: CorynoxineL-瓜抗體包裝250mg
金蕎麥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Urapidil泌乳升高蛋白1抗體包裝25g
金雀花堿,野靛堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fusidate Sodium溶體相關(guān)膜蛋白4α抗體包裝5g
金石蠶苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Fusidate Sodium分化相關(guān)基因14抗體包裝1g
金絲桃苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 3,5-Diiodo-L-tyrosine dihydrateβ內(nèi)酰樣蛋白2抗體包裝5g
金絲桃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Flucloxacillin sodium神經(jīng)突觸粘附樣分子4抗體包裝1g
金松雙黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Parishin A可溶性半乳糖凝集3結(jié)合蛋白抗體包裝5g
金鐵鎖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Maslinic acid瘦抗體包裝25g
金銀花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2-Phenylbenzimidazole-5-sulfonic acid磷脂磷酯LPIN1抗體包裝5g
: 3007資源名稱: 山夫登堡沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR抗鞘磷脂抗體試劑盒番瀉苷C;Sennoside C
紫產(chǎn)色鏈霉菌Streptomyces│violochromogenes 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品抗鞘磷脂抗體試劑盒附子靈;Fuziline
季也蒙假絲酵母果生變種Candida│guilliermondii var. carpophila 質(zhì)量規(guī)格:>99.5%,AR抗鞘磷脂抗體試劑盒飛蓬酯乙;Erigoster B
S1P抑制劑(PF429242 dihydrochloride)增殖相關(guān)核仁抗原抗體楊梅苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Saccharin
NALP12抗體楊梅-3-O-半乳糖苷 Phenolphthalein
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白6抗體楊梅/楊梅(標(biāo)準(zhǔn)品) Salicylic acid
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體楊芽黃(標(biāo)準(zhǔn)品) Propacetamol HCl
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白9抗體洋艾(標(biāo)準(zhǔn)品) Propacetamol HCl
富含亮重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白10抗體洋川芎內(nèi)酯A(標(biāo)準(zhǔn)品) Naphazoline hydrochloride
鈉鈣交換蛋白2抗體洋川芎內(nèi)酯H(標(biāo)準(zhǔn)品) POLYETHYLENE GLYCOL MONO-4-NONYLPHENYL ETHER
抑癌因NDRG2抗體洋川芎內(nèi)酯I(標(biāo)準(zhǔn)品) 4,4'-Diaminodiphenylsulfone
DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體洋薊;1,5-二咖啡??鼘?標(biāo)準(zhǔn)品) Dimenhydrinate