以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Azithromycin為抗生素,能與細(xì)菌核糖體50S亞基結(jié)合,抑制mRNA的翻譯。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):76801-85-9 別名:Azaerythromycin A;9-Deoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A;Desmethyl Azithromycin 純度:98.0% 分子量:734.96 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
麻楓樹酚B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: rU Phosphoramidite肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體包裝5g
(草)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Bz-rA Phosphoramidite磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體包裝1g
(中)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: i-bu-rG Phosphoramidite絲裂原活化蛋白激13抗體包裝25g
根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Dacomitinib多纖毛蛋白抗體包裝5g
麻醉椒苦英文名稱: Ac-rC Phosphoramidite肌管相關(guān)蛋白8抗體包裝100g
麻醉椒英文名稱: Tetrodotoxin巨噬甘露糖受體2抗體包裝25g
馬鞭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Tetrodotoxin周期G1的相互作用蛋白抗體包裝5g
馬勃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Ac-dC Phosphoramidite主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體包裝1g
馬齒莧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2,2'-Anhydro-5-Me-U絲裂原活化蛋白激MKK3抗體包裝5g
馬兜鈴(北馬兜鈴)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dGMYSM1抗體包裝1g
馬兜鈴A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 7-Deaza-7-I-2’-dA單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體包裝5g
馬兜鈴C英文名稱: Dideoxyadenosine微管相關(guān)蛋白1A抗體包裝10g
馬兜鈴D英文名稱: Xylitol中期因子/肝結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體包裝50g
馬兜鈴II英文名稱: Xylitol鹽皮質(zhì)激受體抗體包裝25g
馬蘭草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: 2',3'-Dideoxythymidine促黑激α抗體包裝5g
蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:>98%抗狂犬病試劑盒莪術(shù)二;Germacr-1(10)-e
芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品抗狂犬病試劑盒莪術(shù)烯;
匐枝青霉Penicillium│stoloniferum 質(zhì)量規(guī)格:BS抗狂犬病試劑盒1,3-O-二咖啡??鼘?Cynari
mRNA翻譯抑制劑(Azathramycin)整合αVβ5抗體地蜈蚣(標(biāo)準(zhǔn)品) 4',5,7-Trihydroxy-3',6-dimethoxyflavone
干擾調(diào)節(jié)因子1抗體地榆(地榆)(標(biāo)準(zhǔn)品) Tiliroside
白介6地榆皂苷II(標(biāo)準(zhǔn)品) 4',5-Dihydroxy-7-methoxyflavone
γ干擾誘導(dǎo)蛋白16抗體地榆皂苷I(標(biāo)準(zhǔn)品) Khasianine
整合αVβ1抗體滇藏五味子G Ligustroflavone
白介-20抗體滇桂艾納香(標(biāo)準(zhǔn)品) Schaftoside
干擾相關(guān)發(fā)育調(diào)節(jié)因子2抗體滇雞血藤(標(biāo)準(zhǔn)品) 9,10-Dimethoxy-2,3-(methylenedioxy)-13,13a-didehydrob
白介-1受體相關(guān)激2抗體滇(標(biāo)準(zhǔn)品) Tangeretin
磷化胰島受體β抗體化木蘭花 Tangeretin