以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
Darunavir(TMC114)是HIV蛋白酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:206361-99-1 別名:TMC114 純度:99.39% 分子量:547.66 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
滿山紅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Byakangelicol基質(zhì)金屬蛋白-17抗體包裝25g
蔓荊子黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Byakangelicin膜突蛋白抗體包裝5g
芒果苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: (?)-Bilobalide麻疹病融合蛋白抗體包裝25g
芒果葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Peucedanol紅膜蛋白55抗體包裝5g
莽草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cyclopamine膜相關(guān)環(huán)指蛋白5抗體包裝1g
貓爪草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betulin磷化肌增強(qiáng)因子2C抗體包裝250mg
毛大丁草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betulin線粒體核糖體蛋白MRP63抗體包裝5g
毛冬青(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Betulinaldehyde磷化肌增強(qiáng)因子2C抗體包裝1g
毛冬青皂苷A英文名稱: Betulinic acid基質(zhì)金屬蛋白13抗體包裝25g
毛萼結(jié)晶;毛萼晶A英文名稱: Betulinic acid酪單氧化微管相關(guān)蛋白MICAL抗體包裝5g
毛萼乙英文名稱: Dimethylfraxetin梅克爾-格魯伯綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝25g
毛鉤藤堿英文名稱: Atractylenolide I突變的黑色瘤相關(guān)抗原1抗體包裝5g
毛訶子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Atractylenolide III黑色瘤相關(guān)抗原10抗體包裝1g
毛花苷C英文名稱: Anemoside B4絲裂原活化蛋白激激2抗體包裝25g
毛蘭(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Patchouli alcoholG蛋白偶聯(lián)受體24抗體包裝5g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:BS抗菌肽試劑盒莪術(shù);Curcumol
韓中類芽孢桿菌Paenibacillus│chungangensis 質(zhì)量規(guī)格:BS抗菌肽試劑盒二氫楊梅;Dihydromyricet
草木樨中華根瘤菌Ensifer│meliloti (Dangeard) Young 質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR抗巨病試劑盒二氫槲皮;Taxifolin
HIV蛋白酶抑制劑(Darunavir)整合樣金屬蛋白與凝血10型抗體胱天蛋白5(CASP-5)檢測試劑盒CASP-5 ELISA Kit
嘌呤嘧啶核內(nèi)切2抗體胱天蛋白3(Casp-3)檢測試劑盒Casp-3 ELISA Kit
神經(jīng)絲蛋白抗體胱天蛋白10(CASP-10)檢測試劑盒CASP-10 ELISA Kit
β淀粉樣肽(1-28)抗體骨粘連蛋白(ON)檢測試劑盒ON ELISA Kit
有絲分裂激B抗體骨形成蛋白6(BMP-6)檢測試劑盒BMP-6 ELISA Kit
軟骨蛋白聚糖抗體骨形成蛋白(BMPs)檢測試劑盒BMPs ELISA Kit
去整合樣金屬蛋白10抗體骨涎蛋白(BSP)檢測試劑盒BSP ELISA Kit
含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)檢測試劑盒CTX-2 ELISA Kit
含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體骨特異性性磷B(ALP-B)檢測試劑盒ALP-B ELISA Kit