商品介紹:
MBP146-78是有效的選擇性的cGMP依賴的蛋白激酶抑制劑。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):188343-77-3 純度:99.19% 分子量:335.42 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
青陽參苷元A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: β-Carotene微管相關(guān)蛋白4抗體包裝1g
青陽參苷元B(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sesamoside26S蛋白調(diào)節(jié)亞型7抗體包裝250mg
氫檳榔堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Trigonelline Hydrochloride蛋白酪磷非受體型4抗體包裝1g
氫東莨菪堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Cucurbitacin B腦腸肽O?;D(zhuǎn)移抗體包裝5g
氫高烏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Quercitrin轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子MRG15抗體包裝10MG
苘麻子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Quercetin-7-O-β-D-glucopyranoside髓系/淋巴混合譜系白血病蛋白5抗體包裝25g
秋仙堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: XanthotolT淋巴成熟相關(guān)蛋白抗體包裝5g
曲克蘆?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Sophocarpine基二尿癥cblA抗體包裝100g
驅(qū)蟲斑鳩菊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Alismoxide非平滑肌肌球蛋白2A抗體包裝500g
去斑蝥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: PhellodendrineDNA修復(fù)基磺敏感性基因19抗體包裝100g
去斑蝥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Obacunone 19號(hào)染色體開放閱讀框28抗體包裝25g
去斑蝥鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glycitin珠蛋白1抗體包裝5g
去烏藥堿鹽鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Glycitein肌紅蛋白抗體包裝100g
去氧基姜黃英文名稱: Diosbulbin B錯(cuò)配修復(fù)蛋白6抗體包裝25g
去氧基姜黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱: Coptisine珠蛋白2抗體包裝500g
高地芽孢桿菌Bacillus│altitudinis 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR,可用于培養(yǎng)抗弓形體試劑盒丹參酚B酯;Monomethyl l
產(chǎn)黃青霉Penicillium│chrysogenum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,美國進(jìn)口sc-202975抗肝膜抗體試劑盒杜鵑;farrerol
蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98.0%抗肝胞質(zhì)1型抗體試劑盒酰 ;Cannabisin A
cGMP依賴蛋白激酶抑制劑(MBP146-78)脂質(zhì)磷磷相關(guān)蛋白1/可塑性相關(guān)因3抗體蓮心(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Tetrahydropalmatine
神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體麥冬二氫高異黃A,麥冬黃烷A 4-Bromobenzylamine
富含亮重復(fù)家庭蛋白1抗體麥冬黃A(標(biāo)準(zhǔn)品) Ganoderenic acid B
富含亮重復(fù)家庭蛋白4抗體麥冬黃烷B Tetrahydropalmatine
瘦受體抗體(長(zhǎng))溴東莨菪(標(biāo)準(zhǔn)品) Tetrahydropalmatine
白血病抑制因子抗體假人參皂苷RT1 Pregnenolone Acetate
Nogo受體反應(yīng)蛋白抗體見血飛(標(biāo)準(zhǔn)品) Pregnenolone Acetate
凋亡抑制蛋白抗體劍麻皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品) Chitosan
層粘連蛋白抗體箭根薯(標(biāo)準(zhǔn)品) Chitosan