HaCaT人永生化表皮細(xì)胞

生長特性：貼壁生長

培養(yǎng)基：90%高糖DMEM+10%FBS 協(xié)和引種 90%MEM(EBSS)+10%FBS

規(guī)格：>5×105ml

產(chǎn)品應(yīng)用：細(xì)胞實驗研究。

特點：細(xì)胞代數(shù)為4-5代左右。

細(xì)胞特征：每兩到三天進行換液。細(xì)胞應(yīng)當(dāng)在融合前傳代

冷凍保存方法：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。

用途：本產(chǎn)品只提供給進一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞復(fù)蘇時如何換液呢？

1凍存細(xì)胞取出后37℃速溶，取15ml離心管，加入10ml含血清培養(yǎng)基，將凍存管中液體（通常1.5ml）也加入離心管中，習(xí)慣輕吹幾下混勻，1200轉(zhuǎn)常溫離心5min，去掉上清，加入5ml含血清培養(yǎng)基，輕吹制成細(xì)胞懸液，加入到培養(yǎng)瓶中，即可。

注意，新復(fù)蘇的細(xì)胞不要經(jīng)常去看去動。

換液的話，只要把培養(yǎng)基吸出，再加入新的培養(yǎng)基就可以了

如果你復(fù)蘇的細(xì)胞長得很不均勻，可以胰酶消化下來再混勻后在重新加進去（像正常細(xì)胞一樣做）。

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并 檢查細(xì)胞密度。

 2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
     1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

     2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分 變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng) 瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

     3. 按 6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

     4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

    1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

    2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

    3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

HaCaT人永生化表皮細(xì)胞
注意事項：
1. 收到細(xì)胞后先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)，隔天再取出觀察。此時多數(shù)細(xì)胞均會貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請用臺盼藍染色測定細(xì)胞活力，如果證實細(xì)胞活力正常，請將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請拍下照片及時和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M寄送一次。
4. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。培養(yǎng)瓶內(nèi)多余的培養(yǎng)基可收集備用，細(xì)胞傳代時可以一定比例和客戶自備的培養(yǎng)基混合，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件。
5. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和公司技術(shù)部溝通交流。
6. 該細(xì)胞只能用于科研，不得用于臨床應(yīng)用。