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詳細(xì)介紹
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
新兇手弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒 | Francisella novicidaPCR | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，這個時候，兩個平衡不發(fā)光，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，兩個距離較遠(yuǎn)，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光，被機(jī)器收集到信號，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴(kuò)增的時候，染料結(jié)合到DNA上，從而發(fā)光，單個的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號，我們可以看出，染料法特異性不強(qiáng)，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴(kuò)增，且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾，則可將它們合并為一步，以進(jìn)一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定，是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
乙型肝炎病毒C型探針法熒光定量PCR試劑盒
乙型肝炎病毒D型探針法熒光定量PCR試劑盒
乙型肝炎病毒E型探針法熒光定量PCR試劑盒
乙型肝炎病毒F型探針法熒光定量PCR試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度
Phospho-Stat2 (Tyr690)： 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子2抗體 0.1ml
phospho-Eph receptor A2+A3+A4 (Tyr588 + Tyr596)： 0酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪酸A2+A3+A4抗體 0.1ml
外周髓鞘蛋白-22 Anti-PMP-22 0.2ml
Anti-STK/CK II Alpha/FITC 熒光素標(biāo)記絲/蛋白質(zhì)抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MST1R(Tyr1238) 0酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪抗體 規(guī)格 0.1ml
GRP94 (gp96) 94kDa 糖調(diào)節(jié)蛋白(抗原)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat high mobility group protein 1 (HMG-1) ELISA Kit 大鼠高遷移率族蛋白1(HMG-1)ELISA試劑盒
Humanadenosinedeaminase,ADAELISAKit 人腺苷脫氨酶(ADA)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Chickencarbonicanhydrase,CAELISA試劑盒雞酶(CA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
載玻片細(xì)胞CASPASE-10蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次
MouseHexokinase,HKELISAKit小鼠己糖(HK)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
新兇手弗朗西斯菌PCR檢測試劑盒LFABP/FABP-1(Liver Fatty acid binding protein) 肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
Anti-Adenylate Kinase 1/ AK1 腺苷酸-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-c-Abl(Tyr276) 0酸化非受體酪c-Abl抗體 規(guī)格 0.1ml
AP-Streptavidin專用稀釋液 10ml pH 7.6,高背景或AP存在時推薦使用
VAX2 英文名稱： 視神經(jīng)視網(wǎng)膜相關(guān)蛋白VAX2抗體 0.2ml
phospho-DAXX (Ser671) 英文名稱： 0酸化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體 0.1ml
Anti-Adenylate Kinase 1/ AK1 腺苷酸-1抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
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