化工儀器網(wǎng)
詳細(xì)介紹
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 規(guī)格 |
豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒 | Classical Swine Fever VirusWT(CSFVWT)RTPCR | 50T |
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針法 | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針法即除了引物外另外設(shè)置一個探針，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，這個時候，兩個平衡不發(fā)光，但是當(dāng)DNA通過引物合成的時候，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，兩個距離較遠(yuǎn)，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光，被機(jī)器收集到信號，從而檢測基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴(kuò)增的時候，染料結(jié)合到DNA上，從而發(fā)光，單個的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號，我們可以看出，染料法特異性不強(qiáng)，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中，通過縮減PCR步驟所需時間來完成更快的擴(kuò)增，且不會影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率。快速循環(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶，這類聚合酶在每個結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外，如果引物的退火和延伸溫度相差無幾，則可將它們合并為一步，以進(jìn)一步縮短PCR時間。這一過程也被稱為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時檢測或鑒定和病原微生物，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時檢測或鑒定，是在同一PCR反應(yīng)管中同時加上多種病原微生物的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時檢測多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
傳染性胸膜肺炎放線桿菌(APP)核酸檢測試劑盒
豬附紅細(xì)胞體(SEP)核酸檢測試劑盒
豬圓環(huán)病毒2型(PCV-2)核酸檢測試劑盒
非洲豬瘟(ASFV)核酸檢測試劑盒
PCR實驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝螅?span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度
IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的兔抗長爪沙鼠IgG 0.1ml
FLCN： 卵巢濾泡激素抗體(BHD綜合征) 0.1ml
周期素B1抗體 Anti-Cyclin B1 0.1ml
Anti-PACAP-38 /FITC 熒光素標(biāo)記腺苷酸環(huán)化酶激活肽-38抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059) 0酸化血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體 規(guī)格 0.1ml
IgG/Biotin 化兔抗大鼠IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
小鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒 ，英文名： INS ELISA Kit
小鼠色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測試劑盒Mousepigmeepithelium-derivedfactor,PEDFELISAKit 96T/48T
人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)免疫試劑盒 human thyroid stimulating immunoglobulin,TSI ELISA Kit
Ratbetacellulin,BTCELISAKit大鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織灌注固著液(4%中性多聚甲固著液)50毫升
MouseAquaporin0,AQP-0ELISA試劑盒小鼠水通道蛋白0(AQP-0)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
豬瘟病毒野生株PCR檢測試劑盒EPEC/E.coli(enteropathogenic E.coli，EPEC) 普通大腸埃希菌菌體蛋白(非致病性)Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體 Anti-ATP7B 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-EGFR (Tyr1172) 0酸化表皮生長因子受體抗體 規(guī)格 0.1ml
MEM培養(yǎng)液 250ml 國產(chǎn)
ZMYM2 英文名稱： 鋅指蛋白198抗體 0.1ml
DISC1 (NT) 英文名稱： DISC1 N端抗體 0.2ml
銅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白質(zhì)β鏈抗體 Anti-ATP7B 0.1ml
化工儀器網(wǎng)