PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:滑液支原體PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱:Mycoplasma synoviaePCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測(cè)試劑盒
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
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??刹《?span>PCR檢測(cè)試劑盒
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
SMC4: 染色體結(jié)構(gòu)維持蛋白4抗體 0.2ml
eIF4EBP1: eIF4E結(jié)合蛋白抗體 0.1ml
可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SLC24A5抗體 Anti-SLC24A5 0.1ml
Anti-TERT/FITC 熒光素標(biāo)記端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MBP(Tyr203) 0酸化髓鞘堿性蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
ARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
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Rat maix metalloproteinase 10 (MMP-10) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)金屬10(MMP-10)ELISA試劑盒
HumanMucin-5subtypeAC,MUC5ACELISAKit 人粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
DuckIerferonγ,IFN-γELISA試劑盒鴨γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
載玻片細(xì)胞組蛋白熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
Mousediamineoxidase,DAOELISAKit小鼠氧化酶(DAO)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
滑液支原體PCR檢測(cè)試劑盒Activin A 人活化素 AMulti-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NSMase2 中性鞘0脂2抗體 規(guī)格 0.2ml
Protein Marker 超低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(3.3-20.1kDa)/5條帶 15次
TRIAD3 英文名稱: 鋅指蛋白抑制NFκB蛋白抗體 0.2ml
C20orf20 英文名稱: 20號(hào)染色體開放閱讀框20抗體 0.2ml
Anti-CK18 細(xì)胞角蛋白18抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。