PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:新疆出血熱病毒PCR檢測試劑盒
英文名稱:Xinjiang Hemorrhagic Fever Virus(XHFV=CCHFV)RTPCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
禽白血病病毒亞群PCR檢測試劑盒 Avian Leukosis Virus(ALV)ARTPCR.鏈球菌組PCR檢測試劑盒無乳? Group B Streptococcus spp.(GBS) BPCR ?.魏氏無綠藻PCR檢測試劑盒 Prototheca wickerhamiiPCR
實驗過程:
一、試劑準備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
小鼠粒細胞集落刺激因子(G-CSF)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Rat ciliary neuroophic factor (CF) ELISA Kit 大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CF)ELISA試劑盒
Humanneuophilgelatinase-associatedlipocalin,NGALELISAKit 人中性粒細胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanadrenalcoexaibody,ACAELISA試劑盒人腎上腺皮質(zhì)抗體(ACA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(MET)總活性酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒20次
mouseadrencocoicoopichormone,ACTHELISAKit小鼠促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-phospho-P53(pSer392)/FITC 熒光素標記抗0酸化抑制基因P53抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Gold 金標記兔抗小鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
纖維連結(jié)蛋白抗體 Anti-FN 0.1ml
Goat Anti-Mouse IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標記的羊抗小鼠IgG 0.1ml
FNDC4 英文名稱: Ⅲ型纖維連接蛋白域蛋白4抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-STAT5a(Tyr694) 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Gold 金標記兔抗小鼠IgG(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5ml
新疆出血熱病毒PCR檢測試劑盒BNP(rat) 大鼠腦素/腦尿肽Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Deltex-1 DTX1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh NDUFA9 NDUFA9蛋白抗體 規(guī)格 0.2ml
Human thrombomodulin,TM ELISA Kit 人血栓調(diào)節(jié)蛋白 96T
SPFH2 英文名稱: 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)脂質(zhì)轉(zhuǎn)運相關(guān)蛋白2抗體 0.2ml
C7orf46 英文名稱: 7號染色體開放閱讀框46抗體 0.2ml
Anti-Deltex-1 DTX1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。