PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱:小泰勒蟲PCR檢測試劑盒
英文名稱:Theileria parvaPCR
規(guī)格:50T
分類:PCR檢測試劑盒
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
相關(guān)產(chǎn)品:
肺炎衣原體(CP)核酸檢測試劑盒
鉤端(Lep)核酸檢測試劑盒
人皰疹病毒(HHV)核酸檢測試劑盒
單純皰疹病毒(HSV)核酸檢測試劑盒
實驗過程:
一、試劑準(zhǔn)備 | 二、操作步驟 |
1. DNA模板 2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物??梢允?span>DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物) 3.10×PCR Buffer 4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM 5.Taq酶 | 1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl)???1 μl 加ddH2O至 50 μl 視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。 |
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA試劑盒 ,英文名: EMA IgA ELISA Kit
大鼠橫紋肌輔肌動蛋白α(smActinin-α)ELISA檢測試劑盒RatskeletalmuscleActinin-α,smActinin-αELISAKit 96T/48T
人單皰疹病毒抗原-1(HSV-Ag1)免疫試劑盒 Human Herpes simplex virus,HSV-Ag1 ELISA Kit
RatProgesterone,PROGELISAKit大鼠孕激素/孕同(PROG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Hanks平衡鹽緩沖溶液(HBSS)500毫升
MouseoponinⅠ,Tn-ⅠELISA試劑盒小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Anti-phospho-PAK1(pSer)/FITC 熒光素標(biāo)記抗0酸化p21激活1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Streptavidin/Gold 金標(biāo)記鏈霉親和素(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
FOSL2抗體 Anti-FOSL2 0.1ml
Goat Anti-rabbit IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的羊抗兔IgG 0.1ml
FN3K 英文名稱: 果糖胺-3抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Stat4 (Tyr693) 0酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體 規(guī)格 0.1ml
Streptavidin/Gold 金標(biāo)記鏈霉親和素(10nm/15nm)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.3ml
小泰勒蟲PCR檢測試劑盒NT-4 人神經(jīng)營養(yǎng)素-4Multi-class antibodies規(guī)格: 48T
Anti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 0酸化cyclin D1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh NF-M/Neurofilament M 中分子量神經(jīng)絲蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
Human soluble protein 185,sp185/HER-2 ELISA Kit 人可溶性蛋白185 96T
T7 tag 英文名稱: T7 tag標(biāo)簽抗體 0.1ml
CD99L2 英文名稱: CD99樣蛋白2抗體 0.1ml
Anti-Phospho-Cyclin D1 (Thr286) 0酸化cyclin D1抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
儲存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。