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詳細(xì)介紹
使用方法
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 陽(yáng)性對(duì)照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產(chǎn)品跟市場(chǎng)上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品，則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取，多出的一個(gè)用作樣品制備陽(yáng)性對(duì)照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對(duì)照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復(fù)，則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管，其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品，1 個(gè)用于 PCR 陰性對(duì)照（用水做模板），1 個(gè)用于PCR 陽(yáng)性對(duì)照。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
產(chǎn)品名稱(chēng) | 英文名稱(chēng) | 規(guī)格 |
輪狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒 | Rotavirus RTPCR | 50T |
儲(chǔ)存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
定量PCR方法：
熒光定量PCR探針?lè)?/span> | 熒光定量PCR SYBR Green染料法 | 快速PCR | 多重 PCR |
探針?lè)闯艘锿饬硗庠O(shè)置一個(gè)探針，在探針的兩端分別帶上發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，這個(gè)時(shí)候，兩個(gè)平衡不發(fā)光，但是當(dāng)DNA通過(guò)引物合成的時(shí)候，探針被折斷，釋放出發(fā)光集團(tuán)和淬滅集團(tuán)，兩個(gè)距離較遠(yuǎn)，發(fā)光集團(tuán)產(chǎn)生熒光，被機(jī)器收集到信號(hào)，從而檢測(cè)基因的量 | 染料能夠與雙鏈結(jié)合，當(dāng)PCR擴(kuò)增的時(shí)候，染料結(jié)合到DNA上，從而發(fā)光，單個(gè)的染料不發(fā)光，這樣就能收集到信號(hào)，我們可以看出，染料法特異性不強(qiáng)，只要是雙鏈的DNA都回結(jié)合發(fā)光。 | 在快速PCR中，通過(guò)縮減PCR步驟所需時(shí)間來(lái)完成更快的擴(kuò)增，且不會(huì)影響擴(kuò)增產(chǎn)量和效率?？焖傺h(huán)條件尤其適用于具有高擴(kuò)增能力的DNA聚合酶，這類(lèi)聚合酶在每個(gè)結(jié)合中可引入更多的核苷酸。高合成能力 Taq 聚合酶所需的延伸時(shí)間僅占低合成能力Taq聚合酶所需時(shí)間的1/2至1/3，卻能維持較高的擴(kuò)增效率。此外，如果引物的退火和延伸溫度相差無(wú)幾，則可將它們合并為一步，以進(jìn)一步縮短PCR時(shí)間。這一過(guò)程也被稱(chēng)為 兩步PCR法。 | 多重PCR的主要用于多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定和病原微生物，某些遺傳病及癌基因的分型鑒定。多種病原微生物的同時(shí)檢測(cè)或鑒定，是在同一PCR反應(yīng)管中同時(shí)加上多種病原微生物的特異性引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增.可用于同時(shí)檢測(cè)多種病原體或鑒定出是那一型病原體感染。 |
相關(guān)產(chǎn)品：
伯氏疏PCR檢測(cè)試劑盒
布魯氏菌PCR試劑盒
布魯氏菌核酸熒光PCR檢測(cè)試劑盒（探針?lè)ǎ?/span>
蠶白僵菌PCR檢測(cè)試劑盒
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀?；靹蚝?，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液 濃度和純度
ZBTB3： 鋅指蛋白ZBTB3抗體 0.2ml
DRES17： 癌相關(guān)蛋白DRES17抗體 0.2ml
神經(jīng)元突觸前膜蛋白抗體 Anti-Amph 0.1ml
Anti-YY1/FITC 熒光素標(biāo)記核轉(zhuǎn)錄因子YY1抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-FADD(Ser194) 0酸化Fas死亡結(jié)構(gòu)域相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
CX3CR1(CX3C-chemokine receptor 1) CX3C趨化因子受體1抗原Multi-class antibodies規(guī)格： 0.5mg
小鼠凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1(LOX-1)ELISA試劑盒 ，英文名： LOX-1 ELISA Kit
雞層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測(cè)試劑盒ChickenLaminin,LNELISAKit 96T/48T
人5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)抗體(IgA)免疫試劑盒 Human 5HT IgA ELISA Kit
英文名稱(chēng)MouseGamma-aminobyricacidELISAKit小鼠γ氨基(GABA)規(guī)格：96T/48T
冰凍切片組織CDK4蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次
RatCollageypeⅣ,ColⅣELISA試劑盒大鼠Ⅳ型膠原(ColⅣ)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T
輪狀病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒UPAR 人樣纖溶酶原活化物受體Multi-class antibodies規(guī)格： 48T
Anti-Cyclooxygenase 2/COX2 前列腺素過(guò)氧化物合成酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
Rhesus antibody Rh NMT1 豆蔻?；D(zhuǎn)移酶1抗體 規(guī)格 0.2ml
Human cartilage oligomeric protein,COMP ELISA Kit 人軟骨寡聚蛋白 96T
THBS1 英文名稱(chēng)： 血小板反應(yīng)蛋白抗體 0.1ml
CSPS 英文名稱(chēng)： 磺基轉(zhuǎn)移酶CSPS抗體 0.2ml
Anti-Cyclooxygenase 2/COX2 前列腺素過(guò)氧化物合成酶2抗體Multi-class antibodies規(guī)格： 0.1ml
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