詳細介紹
能將微量的DNA大幅增加,是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法,PCR實驗室廣泛應用于生物醫(yī)學各個領(lǐng)域,例如:艾滋病檢測,乙型肝炎,禽疫病,癌基因的檢測和診斷,DNA指紋,個體識別,親子鑒定及法醫(yī)物證等等。駐馬店實驗室凈化裝修
標準的PCR 實驗室分為四個區(qū)域,分別為:
n1.試劑配制區(qū);
n2.樣品處理區(qū);
n3.核酸擴增區(qū);
n4.產(chǎn)物分析區(qū);
如使用全自動分析儀,區(qū)域可適當合并。三四區(qū)可合并為擴增產(chǎn)物分析。
一、PCR實驗室布局
PCR實驗室原則上為試劑準備區(qū),樣品制備區(qū),擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域,并設有走廊,各工作區(qū)域應設緩沖間,工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。不同功能的工作區(qū)應是分隔獨立的,各工作區(qū)有明顯的標志,不能直通,如果緊密連接,需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū),后兩區(qū)為擴增后區(qū),即從:試劑準備區(qū)——樣品制備區(qū)——PCR擴增室——產(chǎn)物分析室,不得逆向流動。實驗室的氣流也應從擴增前區(qū)流向擴增后區(qū),不得逆向流動。各工作區(qū)頂部應該安裝紫外燈,紫外燈波長為254mm,每20㎡一支40W的紫外燈。
PCR實驗室設計規(guī)劃平面布局
【各區(qū)的功能分別為】
試劑準備區(qū):擴增試劑的配制、分裝和保存。
樣品處理區(qū):樣品登記、分裝;核酸提取、保存和加樣。
擴增產(chǎn)物分析區(qū):擴增產(chǎn)物的測定、結(jié)果分析、登記及報告。
擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應嚴格分開,須使用不同的房間,兩區(qū)之間建議有一定的間隔。
二、PCR實驗室主要設備
試劑準備區(qū)
儀器設備主要有冰箱、超凈臺、加樣器、混勻器、天平和離心機等,加樣器、天平除了要外,還應有定期校準。 試劑分裝應在超凈臺中進行 擴增反應混合液應使用分子生物學級的,試劑制備好后應有質(zhì)檢:一是否有污染、二是檢測試劑的擴增效果。
標本制備區(qū)
儀器設備主要有生物安全柜、加樣器、離心機、溫育儀、混勻器
擴增區(qū)
擴增區(qū)的主要儀器是核酸擴增儀、超凈臺、微量加樣器、離心機、可移動紫外燈。擴增儀需進行校準。并配備UPS電源,以防止由于電壓的波動,停電對擴增效果的影響。
分析區(qū)
本區(qū)所使用的儀器設備有酶標儀、洗板機、加樣器和水浴箱等 潔凈實驗區(qū)的緩沖間部分面積不能超過主實驗室的八分之一,這是有規(guī)定的。
三、PCR實驗室建設規(guī)劃要點
1、主體結(jié)構(gòu):
主體為彩鋼板、鋁合金型材。室內(nèi)所有陰角、陽角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,從而解決容易污染、積塵、不易清掃等問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡明,美觀大方,密封性好。
2、標準的三區(qū)分隔和氣壓調(diào)節(jié):
將PCR過程分成試劑準備、標本制備和PCR擴增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立實驗區(qū)設置有緩沖區(qū), 同時各區(qū)通過氣壓調(diào)節(jié),使整個PCR實驗過程中試劑和標本免受氣溶膠的污染并降低擴增產(chǎn)物對人員和環(huán)境的污染。
可打開緩沖區(qū)Ⅰ,緩沖區(qū)Ⅱ和 PCR 擴增區(qū)的排風扇往外排氣,在實驗區(qū)的外墻上和各扇門上都安裝有風量可調(diào)的回風口,空氣通過回風口向室內(nèi)換氣。
3、 消毒:
在三個實驗區(qū)和三個緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。
在試劑準備區(qū)和標本制備區(qū) 還設置移動紫外線燈,對實驗桌進行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗:
試劑和標本通過機械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和標本在傳遞過程中不受污染(人物分流)
5、 地面:
地面建議使用PVC卷材地面或自流坪地面,整體性好。便于進行清掃,耐腐蝕。
6、照明:
燈具要選用凈化燈具,能達到便于清洗、不積塵的特點。
在建設過程注意事項
●規(guī)范的安裝流程和全面的服務流程。
●嚴格按照規(guī)范科學設計的安裝流程。
●安裝前需要確定以下安裝條件,如:電源電壓,電源進線位置,電話網(wǎng)絡線進線位置,進水水壓,小安裝空間,地面平整度,通風孔、進水管和下水管的位置等,理想狀態(tài)的空間尺寸和通風口尺寸。
四、污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產(chǎn)物的污染;天然基因組DA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結(jié)果必須作廢,需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。駐馬店實驗室凈化裝修
4.1工作區(qū)域的嚴格劃分
(1)各個實驗區(qū)域設置合理
(2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面鱖色等),以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。
4.2合理的系統(tǒng)設置
(1)合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置,盡量釆用全送全排的空調(diào)系統(tǒng);
2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
4.3規(guī)范的操作
(1)臨床基因擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓,經(jīng)培訓冾格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作
2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經(jīng)常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施;
(3)清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)朿后,必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行摽拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
4.4嚴格的管理
(1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門
(2)在各個實驗區(qū)域使用帶有明顯區(qū)別標志的工作服(如不同顏色),當工作人員離開時不得將本區(qū)的工作服帶至其它區(qū)域;
(3)盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
4)擴增產(chǎn)物分析區(qū)是主要的擴增產(chǎn)物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等
5)擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì),應特別注意實驗人員的安全防護。
4.5完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。