詳細介紹
次黃嘌呤
別名:次黃堿;6-氧嘌呤;6-羥基嘌呤;6-Hydroxypurine。
英文名稱:Hypoxanthine
CAS:68-94-0
分子式:C5H4N4O
分子量:136.11
儲存條件:室溫保存
純度:≥99%
外觀(性狀)無色針狀結(jié)晶
單位:瓶
次黃嘌呤
1g 100元
5g 400元
應(yīng)用:
生化試劑,制備生物培養(yǎng)基,例如HAT選擇性培養(yǎng)基的制備。
原理:
在單抗制備中,由于需要進行選擇性殺死非目標(biāo)細胞,所以使用添加HAT的選擇性培養(yǎng)基,其依據(jù)是細胞中的DNA合成有兩條途徑:一條途徑是生物合成途徑(“D途徑”),即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸,為DNA分子的合成提供原料。在此合成過程中,葉酸作為重要的輔酶參與這一過程,而HAT培養(yǎng)液中氨基蝶呤是一種葉酸的拮抗物,可以阻斷DNA合成的“D途徑”。另一條途徑是應(yīng)急途徑或補救途徑(“S途徑”),它是利用—鳥嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)催化和胸腺嘧啶核苷生成相應(yīng)的核苷酸,兩種酶缺一不可。因此,在HAT培養(yǎng)液中,未融合的效應(yīng)B細胞和兩個效應(yīng)B細胞融合的“D途徑”被氨基蝶呤阻斷,雖“S途徑”正常,但因缺乏在體外培養(yǎng)液中增殖的能力,一般10d左右會死亡。對于骨髓瘤細胞以及自身融合細胞而言,由于通常采用的骨髓瘤細胞是—鳥嘌呤磷酸核苷轉(zhuǎn)移酶缺陷型(HGPRT)細胞,因此自身沒有“S途徑”,且“D途徑”又被氨基蝶呤阻斷,所以在HAT培養(yǎng)液中也不能增殖而很快死亡。只有骨髓瘤細胞與效應(yīng)B細胞相互融合形成的雜交瘤細胞,既具有效應(yīng)B細胞的“S途徑”,又具有骨髓瘤細胞在體外培養(yǎng)液中長期增殖的特性,因此能在HAT培養(yǎng)液中選擇性存活下來,并不斷增殖。通常HAT中,H()的濃度為1×10-4M,A(氨基蝶呤)為4×10-7M,T(胸腺嘧啶)為1.6×10-5M,在HT培養(yǎng)基中,只需要不加氨基蝶呤,其它都同HAT。