玻璃酸酶測定法

試劑

（1） 醋酸-醋酸鉀緩沖液 取醋酸鉀 14g，冰醋酸 20.5ml，再加水稀釋至 1000ml。

（2） 磷酸鹽緩沖液 取磷酸二氫鈉 2.5g、無水磷酸氫二鈉 1.0g 與氯化鈉 8.2g，加水溶解至 1000mL。

（3） 水解明膠 取明膠 50g，加水 1000ml，在 121℃加熱 90 分鐘，然后冷凍干燥。

（4） 水解明膠稀釋液 取磷酸鹽緩沖液與水各 250ml，加水解明膠 330mg，搖勻，在 0～4℃保存。如溶液不發(fā)生渾濁，可繼續(xù)使用。

（5） 血清貯備液 取新鮮牛血清或凍干牛血清（先用水溶解并稀釋至標示量體積）1份，加醋酸-醋酸鉀緩沖液 9 份稀釋，再以 4mol/L 鹽酸溶液調節(jié) pH 值至 3.1，放置 18～24小時后再用。在 0～4℃保存，可應用 30 日。

（6） 血清溶液  血清貯備液中血清總固體（取牛血清適量，置裝有潔凈砂粒并在 105℃干燥至恒重的坩堝中，置水浴上蒸干后，再在 105℃干燥至恒重）在 8%左右者，取 1 份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液 3 份稀釋；血清總固體在 5%左右者，取 1 份，用醋酸-醋酸鉀緩沖液 2份稀釋。臨用時制備。

（7） 玻璃酸鉀貯備液 取預先經(jīng)五氧化二磷減壓干燥 48 小時的玻璃酸鉀，加水制成每 1ml 中含 0.5mg 的溶液。在 0℃以下保存，可應用 30 日。

（8） 玻璃酸鉀溶液 取玻璃酸鉀貯備液 1 份，用磷酸鹽緩沖液 1 份稀釋。臨用時制備。

標準品溶液的制備 精密稱取玻璃酸酶標準品適量，加冷的水解明膠稀釋液制成每1ml 中含 1.5 單位的溶液。臨用時制備。

供試品溶液的制備 按供試品的標示量或估計效價精密稱取供試品適量，加冷的水解明膠稀釋液制成每 1ml 中含約 1.5 單位的溶液。臨用時制備。

標準曲線的制備 取大小相同的試管 12 支，按順序加入標準品溶液 0.00ml、0.10ml、 0.20ml、0.30ml、0.40ml 與 0.50ml，各 2 支；再依次相應加入水解明膠稀釋液 0.50ml、0.40ml、0.30ml、0.20ml、0.10ml 與 0.00ml，每隔 30 秒順序加入玻璃酸鉀溶液 0.50ml，使每一管的總體積為 1.00ml，搖勻，置 37℃±0.5℃水浴中；每管準確保溫 30 分鐘后，每間隔 30 秒鐘

順序取出，立即順序加入血清溶液 4.0ml，搖勻，在室溫放置 30 分鐘，搖勻，在 640nm 的波長處測定吸光度；同時以磷酸鹽緩沖液 0.50ml 代替玻璃酸鉀溶液，加水解明膠稀釋液 0.50ml，搖勻，按上述方法自“置 37℃±0.5℃的水浴中"起同法操作，作為空白。以吸光度為縱坐標，標準品溶液的效價（單位）為橫坐標繪制標準曲線。

測定法 取大小相同的試管 6 支，依次加供試品溶液 0.20ml、0.30ml 與 0.40ml，各 2支；再依次相應加入水解明膠液 0.30ml、0.20ml 與 0.10ml，照標準曲線的制備項下， 自“每隔 30 秒順序加入玻璃酸鉀溶液 0.50ml"起，依法測定，自標準曲線上查得效價（單位）后，分別除以供試品的重量（mg），算出 6 份供試品的平均數(shù)，即為玻璃酸酶的效價（單位）。