jenabioscience:Taq聚合酶
不含緩沖液的熱穩(wěn)定DNA聚合酶
水生棲熱菌,重組,大腸桿菌
Jena Bioscience由Max-Planck-Institute of Molecular Physiology(Dortmund)的一組科學(xué)家于1998年成立,利用超過25年的學(xué)術(shù)知識為100多個國家的研究和行業(yè)客戶開發(fā)創(chuàng)新試劑。
供一般實驗室使用。
單位定義:一個單位被定義為使用hering精子DNA作為底物,在70℃下30分鐘內(nèi)催化10納摩爾dNTP結(jié)合成酸不溶性形式所需的酶量。
運輸:凝膠包裝運輸
儲存條件:儲存在-20°C
避免冷凍/解凍循環(huán)
保質(zhì)期:12個月
表單:液體
濃度:5單位/微升
描述:
該聚合酶被推薦用于常規(guī)PCR應(yīng)用(最大4 kb片段長度)或高通量PCR。
這種酶在72℃復(fù)制DNA,在鎂存在的情況下催化核苷酸聚合成5’→3’方向的雙鏈DNA。它還具有5’→3’聚合依賴性核酸外切酶替換活性,但缺乏3’→5’核酸外切酶(校對)活性。
內(nèi)容:
不包括反應(yīng)緩沖液和核苷酸。請參考我們的緩沖液&成分和核苷酸部分。
Taq聚合酶
20 mM Tris-HCl、100 mM KCl、0.1 mM EDTA、1 mM DTT、穩(wěn)定劑、50 % (v/v)甘油、pH 8.0(25℃)中的5單位/μl Taq DNA聚合酶
檢測設(shè)置:
開始前,融化所有成分并*底渦旋以確保均勻性。
成分 | 最終檢測濃度。 |
PCR級水 | 填充至最終數(shù)量 |
反應(yīng)緩沖液 | 1個 |
dNTP混合 | 200微米 |
Taq聚合酶 | 0.025-0.05單位/微升 |
每種底漆的底漆混合物 | 每種引物200-400納米 |
模板/樣本DNA | < 10 ng DNA/assay |
循環(huán)條件:
快速旋轉(zhuǎn)試管/平板以去除氣泡,并將其放入循環(huán)儀中。
最初的 變性 | 95攝氏度 | 2分鐘 | 1個 |
變性 熱處理1) 延長2) | 95攝氏度 50-68攝氏度 72攝氏度 | 10-20秒 10-20秒 20秒- 4分鐘 | 25-30倍 |
1)退火溫度取決于所用引物的熔化溫度。
2)延伸時間取決于待擴增片段的長度。建議時間為1分鐘/kb。
推薦的緩沖系統(tǒng):
紅寶石緩沖液(#PCR-272)包括密度試劑+追蹤染料,并允許將PCR產(chǎn)物直接裝載到電泳凝膠中。對于DNA檢測/熒光DNA染色,我們建議使用新一代染料(例如SYBR DNA Stain,#PCR-273)代替經(jīng)典但高度誘變的溴化乙錠。,
晶體緩沖液(#PCR-271)推薦用于下游應(yīng)用,如DNA測序、連接、限制性消化或需要通過吸光度或熒光激發(fā)分析PCR產(chǎn)物的情況。對于凝膠電泳,在將PCR加載到凝膠中之前,添加凝膠加載緩沖液和熒光DNA染色劑(例如,帶有DNA染色劑的凝膠加載緩沖液,#PCR-274 - #PCR-276)。使用預(yù)染色凝膠或運行后染色方案也是可能的。,
KCl緩沖液(#PCR-262)推薦用于常規(guī)PCR反應(yīng)。緩沖液針對最高特異性進行了優(yōu)化,但可能需要對檢測參數(shù)(如MgCl)進行額外微調(diào)2濃度和退火溫度。,
標(biāo)記緩沖液(#PCR-263)推薦用于DNA標(biāo)記或誘變應(yīng)用。緩沖液是專門為將標(biāo)記或修飾的核苷酸摻入DNA而優(yōu)化的。對于大多數(shù)引物-模板對,它在廣泛的反應(yīng)條件下給出了優(yōu)異的結(jié)果,但是擴增也可能傾向于增加不準(zhǔn)確性。
MgCl的優(yōu)化2濃度:
MgCl2溶液- 25毫米(#PCR-266)建議用于優(yōu)化最終的Mg2+專注。最佳功能需要1.5-2.0 mM的濃度。較低的濃度產(chǎn)生較高的特異性,而較高的濃度產(chǎn)生較高的產(chǎn)量。
相關(guān)產(chǎn)品:
dNTP Mix - 10 mM, #NU-1023
Ruby Buffer, #PCR-272
Crystal Buffer, #PCR-271
KCl Buffer, #PCR-262
MgCl2 Solution - 25 mM, #PCR-266"
上海牧榮生物科技有限公司
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