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產地類別 | 進口 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產業(yè) |
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電轉儀celetrix
細胞電轉染(電轉),也叫細胞電穿孔(electroporation), 是把外源大分子物質DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白質以及一些小分子等導入細胞膜內部的重要方法。
在瞬間強大電場的作用下,溶液中細胞的細胞膜具有了一定的通透性,帶電的外源物質以類似電泳的方式進入細胞膜。 由于細胞膜磷脂雙分子層的電阻很大,細胞外部電流場產生的細胞兩極電壓都被細胞膜承受,細胞質內分到的電壓可以忽略不計,細胞質內部幾乎沒有電流,因此也決定了正常范圍內的電轉過程中細胞毒性很小。 電場使DNA等物質進入細胞膜后只能停止在細胞膜附近,隨后細胞本身的機制可以允許這些物質到細胞核等處。
普通電轉能量過高可導致部分細胞因膜破壞而死亡,其中能存活下來的細胞內部都不會受到電流影響,因為細胞膜完整是細胞存活的必要條件。
由千電轉技術依靠的是物理方法,細胞表面的分子特性對電轉影響比較小。 相比化學轉染方法和病毒載體轉染方法,電轉可以用在所有的細 胞種類上,而且容易定量控制。
以及相關的電擊管與電轉液綜合優(yōu)化了儀器電學特性、 電擊管內的電場均勻度以及電轉液的細胞保護作用,是獲得高效、 低毒性細胞電轉的解決方案。
celetrix電轉儀應用:
• 有效的細胞:幾乎所有的真核細胞,包括所有細胞系,原代細胞,干細胞,血液和免疫類細胞,神經細胞,植物細胞和胚胎。
• 可以電轉的物質包括DNA、 RNA、 siRNA、 蛋白質等。
• 適用實驗:瞬時或穩(wěn)定表達蛋白質、 基因敲除與敲入、 siRNA和其他分子機制研究。
• 科研領域:細胞分子生物學、 免疫學、 血液學、 神經學、 癌癥研究、 新藥開發(fā)等。
功能強大 操作簡單
效率高 細胞死亡率低
適用所有真核細胞;可以電轉DNA、RNA、siRNA、蛋白質等;
外觀美觀、界面簡潔、操作簡單。
電脈沖參數(shù)設定方便,內部電路反應迅速,設定完成即可啟動,瞬間完成電轉。
示波器功能,顯示實際通過樣品的電流波形,可視化掌控實驗質量。
LED照明燈,清楚指示電擊管連接狀態(tài)。
功率強大,單次高效電轉可達1000ul,可以經濟快速的電轉大量細胞。
全部過程只需5步
1、懸浮細胞(貼壁細胞先消化成單細胞狀態(tài))1000rpm離心3min。
2、無血清細胞培養(yǎng)液洗一遍、1000rpm離心1min。
3、重懸細胞在電轉液中,加入DNA,將細胞轉移至電擊管蓋好并放入儀器中。
4、設定參數(shù)進行電擊,大部分細胞系可以使用30ms單脈沖,只需改變一個電壓參數(shù)。
5、取出細胞進行培養(yǎng)。
技術參數(shù)
儀器型號 |
LE款 |
EX款 | |
體積使用范圍 |
20ul~200ul |
20ul~1000ul | |
常用細胞量 |
20ul |
0.2×106~2×106 |
0.2×106~2×106 |
120ul |
1.2×106~1.2×107 |
1.2×106~1.2×107 | |
200ul |
2×106~2×107 |
2×106~2×107 | |
600ul |
6×106~6×107 | ||
1000ul |
1×107~1×108 | ||
電轉脈沖電壓 |
300V-1500V |
300V-1500V |
celetrix電轉儀應用的優(yōu)勢:
Celetrix新一代電轉可以高效轉染從新鮮PBMC到刺激培養(yǎng)階段的T細胞。 與其他電轉技術相比, Celetrix電轉技術具有效率。
我們的技術也具有細胞存活率,并且細胞在電轉后能夠和未電轉細胞
Celetrix電轉儀使得CAR-T, TCR-T制備、 CRISPR介導的基因編輯等變得容易。
目前70%以上的治療性抗體蛋白都是由CHO細胞產生
的,Celetrix電轉技術對CHO細胞可以達到高效穩(wěn)定
(90%以上)的電轉效率和80%以上的存活率, 為治療 性抗體細胞轉染領域提供了更加高效、便捷、 穩(wěn)定的轉 染方法。
利用Celetrix的電轉技術電轉Cas9蛋白和gRNA (+)或者Cas9蛋白,通過T7El核酸內切酶檢測基因編輯效率,在APP, AAVSl, OCT4和PDCDl四個基因位點的編輯效率均超過50%, 其中AAVSl基因位點編輯效率能夠達到70%。
• 電極杯中樣品與電極接觸面積大,電化學反應產生毒性物質多,并且產生非常多的氣泡。 氣泡對電轉的實際影響非常大。
• 由千氣泡是絕緣體,電流只能從氣泡之間的間隙溶液流過,這樣導致氣泡間隙的溶液中電流富集升高,處千其中的細胞因承受太高的電壓而死亡。
電極杯內的溶液上方受到液面效應影響,電場不均勻。 靠近兩個電極1-2mm的區(qū)域由千氣泡的作用,電場也不均勻。電極杯內電場比較均勻的較優(yōu)電轉區(qū)域很?。ㄓ覉D藍色部分),而1mm或者
2mm的電極杯甚至可能沒有較優(yōu)電轉 區(qū)域。
液體樣品密封呈規(guī)整圓柱形,沒有液面效應影響電場均勻度。
電極與液體接觸面積小,氣泡少又而且被壓縮,不影響電流分配。
電擊管內部電場均勻,全部都是有效電轉 區(qū)域。
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