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倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟
閱讀：793 發(fā)布時間：2021-5-26倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用步驟：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備O157:H7標準曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標準品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標準曲線。
磷酸化APS抗體
有絲分裂激酶A抗體
干擾素誘導蛋白AIM2抗體
水通道蛋白-2抗體
腫瘤抑制基因ABI2/精氨酸酪氨酸蛋白激酶結合蛋白抗體
ADP核糖基化因子樣11抗體
ARM重復X連鎖蛋白ARMCX3抗體
ARM重復X連鎖蛋白ARMCX1抗體
ARM重復X連鎖蛋白ARMCX2抗體
自噬相關蛋白10抗體
?；o酶A結合結構域蛋白6抗體
氨基?；?抗體
脂肪甘油三酯脂酶抗體
磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α1抗體
雙調蛋白抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
粘附相關激酶抗體
磷酸化粘附相關激酶抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化水通道蛋白2抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體
磷酸化蛋白激酶B抗體
磷酸化APP淀粉樣肽前體蛋白抗體