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產(chǎn)品簡介
雜色青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。
詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Penicillium versicolor |
貨號 | CP934586 |
產(chǎn)品特征:
雜色青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒靈敏度高：能對低拷貝或多樣性模板進(jìn)行定量。
特異性強(qiáng)：采用熱啟動酶的激活機(jī)制，抑制非特異性擴(kuò)增 。
重復(fù)性好：擴(kuò)增曲線重合度高，受干擾影響少。
擴(kuò)增效率高：擴(kuò)增曲線Ct值低，起峰快，效率高。
原理:
所謂實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。產(chǎn)品僅用于科研
檢測方法：
1.Ⅰ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號，從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
熒光定量PCR實(shí)驗步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
以下是雜色青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒的相關(guān)產(chǎn)品：
4-硝基苯基-α-D-吡喃甘露糖苷小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)ELISA試盒
4-硝基苯基-α-L-吡喃巖藻糖苷小鼠肺表面活性蛋白D(SP-D)ELISA試盒
4-硝基苯基-β-D-吡喃木糖苷小鼠肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT)ELISA試盒
4-硝基苯基-β-L-吡喃巖藻糖苷小鼠肥大/干細(xì)胞生長因子受體(試盒/Sl/CD117)ELISA試盒
5'-碘-2-去氧尿核苷小鼠芳香酶ELISA試盒
5-氟尿苷小鼠二?；视?DAG/DG)ELISA試盒
5-基胞苷小鼠二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA試盒
5-基尿苷小鼠二胺氧化酶(DAO)ELISA試盒
5'-脫氧-5'-硫基腺苷小鼠兒茶酚抑素ELISA試盒
5--4--3-吲哚基-β-D-吡喃半乳糖苷小鼠多萜長醇二酸寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移酶(DDOST/OST-48)ELISA試盒
5-脫氧尿苷小鼠多肽YY(PYY)ELISA試盒
6-氮尿苷小鼠多巴胺D1受體(D1R)ELISA試盒
6--2-萘基-α-D-半乳糖苷小鼠多巴胺(DA)ELISA試盒
6--2-萘基-β-D-吡喃葡糖苷小鼠端粒酶(TE)ELISA試盒
7-基鳥嘌呤核苷小鼠蕈型酰膽受體M2(mAChRM2)自身抗體ELISA試盒次黃嘌呤核苷成分標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)58-63-90.1g/瓶
次黃嘌呤 Hypoxanthine68-94-020mg/支，供HPLC法含量測定用
雌三醇-d3Estriol-d3[79037-36-8]1mg
雜色青霉探針法熒光定量PCR檢測試劑盒雌激素酮-D4ESTRONE-D45mg
雌酚酮-d2Estrone-16,16-d2[56588-58-0]0.05g
雌二醇-D4ESTRADIOL-d45mg
雌二醇-13C2ESTRADIOL-13C21.2ml
雌二醇(E2)3支/套，0.5ml/支，供免疫測定用
雌二醇(E2)3支/套，0.5ml/支，供免疫測定用
純銅光譜分析標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)-純銅T250g/瓶
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 µL、20µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
具有下列特點(diǎn)：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化，特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結(jié)果。產(chǎn)品僅用于科研
方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，產(chǎn)品僅用于科研在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | |
英文名稱 | Nocardia brasiliensis |
貨號 | CP934530 |
巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。產(chǎn)品僅用于科研
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DN段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記6個離心管，分別為6，5，4，3，2和1號。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽性對照。
5. 換槍頭，從6號管中取5 μL溶液到5號管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽性對照。
6. 換槍頭，從5號管中取5 μL溶液到4號管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。
7. NC管中不加任何陽性對照。
8. 從1-6號管中分別取5 μL和待測樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
探針熒光定量PCR試劑盒原理分析如下圖：
應(yīng)用案例：
樣品 DNA 的制備
1.用自選方法純化樣品的 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 DNA 提取試劑盒兼 容。。也可以選購本公司的一管式病毒 DNAout 或其升級版柱式病毒 DNAout。 本試劑盒免費(fèi)贈送 15 次 DNA 病毒裂解液試用裝（一管式病毒 DNAout 的成分）。產(chǎn)品僅用于科研
稀釋陽性對照（以 10E2-10E7 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的長為 86bp 的 DN段作為陽性對照。
2.標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3.用帶芯槍頭分別加入 45 μL 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4.在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。5.換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6.換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7.換槍頭，在 4 號管中加 5 μL 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照到 4 號管中，得1×10E4 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
8.重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。設(shè)置 qPCR 反應(yīng)（20 μL 體系，在樣品制備室進(jìn)行）
9.在 PCR 管中加入下列成分。產(chǎn)品僅用于科研
注意事項：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。
探針法：
aqMan 探針是一種寡核苷酸探針，它的熒光與目的序列的擴(kuò)增相關(guān)。它與目標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’ 末端，而淬滅劑則在3’ 末端。當(dāng)完整的探針與目標(biāo)序列配對時，熒光基團(tuán)發(fā)射的熒光因與3’ 端的淬滅劑接近而被淬滅。但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時，聚合酶的5’ 外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累。因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。相對于染料法,Taqman探針法具有更高的特異性和準(zhǔn)確性。
以下是公司正在*的產(chǎn)品：
基化汞通用型水稻白葉枯病野油菜假單孢菌水稻變種（Xanthomonas campestris pv.oryzae；Xco）基因檢測試盒
酸亞汞通用型野油菜黃單胞菌菜豆疫病致病變種（Xanthomonas campestris pv.pelargonii；Xcp）基因檢測試盒
(2-羥基)三基化銨通用型野油菜黃單胞菌菜豆疫病致病變種（Xanthomonas campestris pv.phaseoli；Xcph）基因檢測試盒
2-羥基-1-萘基化銨通用型番茄瘡痂病辣椒斑點(diǎn)病菌（Xanthomonas campestris pv.vesicatoria；Xcv）基因檢測試盒
氨基磺酸銨通用型角胡麻葉斑病嗜麥芽黃黃單胞菌（Xanthomonas maltophilia；Xm）基因檢測試盒
苯基三基碘化銨通用型柑桔枯萎病茍養(yǎng)木桿菌（Xylella fastidiosa；Xf）基因檢測試盒
巴西諾卡菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒吡咯二硫代氨基酸銨通用型甘薯黑斑病（Ceratocystis fimbriata）基因檢測試盒
芐基二基十六基化銨數(shù)字化染色體基因型*分析技術(shù)試盒
芐基三基化銨數(shù)字化表觀基因組*分析技術(shù)試盒
芐基三基化銨染色體單體分離分析技術(shù)試盒
草酸高鐵銨SAGE基因表達(dá)文庫構(gòu)建技術(shù)試盒
次亞酸銨SAGE基因表達(dá)文庫構(gòu)建技術(shù)服務(wù)
碘化苯基三銨SiRNA完整表達(dá)文庫構(gòu)建技術(shù)試盒
碘化四庚銨基因拼接圖譜*分析技術(shù)試盒
碘化四戊銨基因靶標(biāo)技術(shù)試盒甘精胰島素 Insulin Glargine160337-95-115mg，HPLC鑒別、含量測定及生物活性檢查用
甘氨酰谷氨酰胺 Glycyl Glutamine172669-64-620mg/瓶，供鑒別及系統(tǒng)適用性試驗使用
甘氨酰谷氨酰胺 Glycyl Glutamine172669-64-620mg/瓶，供鑒別及系統(tǒng)適用性試驗使用
甘氨酸 Glycine56-40-6100mg，鑒別和含量測定
甘氨雙唑鈉 Sodium Glycididazole100mg/支，供HPLC法測定用
甘氨雙唑鈉 Sodium Glycididazole100mg/支，供HPLC法測定用
改良馬對照培養(yǎng)基11.4g/400mL/袋
伽馬環(huán)糊精 Gamma cyclodextrin17465-86-0100mg/瓶，紅外鑒別和含量測定
伽馬環(huán)糊精 Gamma cyclodextrin17465-86-0100mg/瓶，紅外鑒別和含量測定
覆盆子 RUBI FRUCTUS2 g/支，TLC法鑒別