詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
口腔黏膜 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8239 |
細胞簡介:
大鼠口腔黏膜成纖維分離自口腔黏膜組織;口腔(oral cavity)是消化道的起始部分。前借口裂與外界相通,后經(jīng)咽峽與咽相續(xù)??谇粌?nèi)有牙、舌等器官。口腔的前壁為唇、側(cè)壁為頰、頂為腭、口腔底為黏膜和肌等結(jié)構(gòu)??谇唤枭?、下牙弓分為前外側(cè)部的口腔前庭(oral vestibule)和后內(nèi)側(cè)部的固有口腔(oral cavity proper);當(dāng)上、下頜牙咬合時,口腔前庭與固有口腔之間可借第三磨牙后方的間隙相通。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來。成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質(zhì)嗜弱堿性,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的表皮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質(zhì)透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網(wǎng)狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠口腔黏膜成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的大鼠口腔黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
大鼠口腔黏膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、淋巴細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔子白介素1可溶性受體I(IL-1sRⅠ)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔鉤端IgG(LepIgG)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔原片段F1+2(F1+2)ELISAKit ELISA. 96T/48T
兔子上腺髓質(zhì)素(ADM)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat adrenomedullin (ADM) ELISA Kit 大鼠腎上腺髓質(zhì)素(ADM)試劑盒
HumanCalretinin,CRELISAKit 人鈣結(jié)合蛋白(CR)試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCaveolin-1,Cav-1試劑盒人窖蛋白(Cav-1)試劑盒規(guī)格:96T/48T
轉(zhuǎn)基因油菜(canola)T45品系試劑盒20次
HumanSialicacid,SAELISAKit人唾液酸(SA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
14-3-3 sigma 重組鼠單克隆抗體
磷酸化叉頭蛋白家族抗體
INHBA重組小鼠 Inhibin beta A / INHBA / Activin A 蛋白 Protein
Agrin peptide 聚集蛋白抗原 0.5mgAgrin peptide 聚集蛋白抗原
PSG6重組人 PSG6 / PSG10 蛋白 Protein
GPA33 Protein Human 重組人 GPA33 / Glycoprotein-A33 蛋白
TNFRSF1A Protein Rat 重組大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (Fc 標簽)
Agrin peptide 聚集蛋白抗原 0.5mgAgrin peptide 聚集蛋白抗原
GPA33 Protein Human 重組人 GPA33 / Glycoprotein-A33 蛋白
INHBA重組小鼠 Inhibin beta A / INHBA / Activin A 蛋白 Protein
TNFRSF1A Protein Rat 重組大鼠 TNFR1 / CD120a / TNFRSF1A 蛋白 (Fc 標簽)
PSG6重組人 PSG6 / PSG10 蛋白 Protein
大鼠口腔黏膜成纖維細胞大鼠白三烯D4(LTD4)試劑盒 ,英文名: LTD4 ELISA Kit
Mouse beta 2 glycoprotein aibody IgA/G/M (1 beta 2-GP1 IgA/G/M) ELISA Kit 小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)試劑盒
ELISA 小鼠Ghrelin(mouse Ghrelin) 進口分裝
CLIAKitforIRAP(HumanICEprotease-activatingfactor)ELISAKit人ICE蛋白酶激活因子
通用型非變性裂解液適合各種細胞native蛋白
ELISAKitNE大鼠中性粒細胞彈性蛋白酶
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂浮;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗;
4、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行