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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
骨 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X8230 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮分離自骨組織；股骨頭（caput femoris）呈圓形，約占一圓球的2/3，其上為關(guān)節(jié)軟骨所覆蓋，在其頂部微后有一小窩，稱為股骨頭凹，為股骨頭韌帶附著處，股骨頭可由此獲得少量血供。股骨頭骨髓的微血管結(jié)構(gòu)為珊瑚狀，后毛細(xì)血管微動(dòng)脈與微靜脈部分膨大、迂曲、互相纏繞；骨微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成了骨內(nèi)微血管的內(nèi)襯，與骨內(nèi)其他成分聯(lián)系密切，參與了許多骨的病理生理過程在骨吸收新骨的形成血管再生營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)骨內(nèi)代謝產(chǎn)物輸出及維持骨內(nèi)微環(huán)境平衡方面具有重要作用。
方法簡(jiǎn)介：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮采用混合膠原酶消化制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè)：
實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，細(xì)胞純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、EGF、bFGF、IGF、VEGF、Heparin、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳1-3代左右；2代以內(nèi)狀態(tài)優(yōu)良
消化液：0.25%，Accutase
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng)。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠蛋白激酶A(PKA)試劑盒 96T/48T
小鼠膽囊收縮素8（CCK-8）試劑盒 96T/48T
小鼠膽囊收縮素/腸促肽(CCK)試劑盒 96T/48T
小鼠酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)試劑盒 96T/48T
小鼠結(jié)腸癌抗原(CCA)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human breast cancer susceptibility protein 1 (BFAA-1) ELISA Kit 人癌易感蛋白1(BFAA-1)試劑盒
HumandysophinELISAKit 人肌養(yǎng)蛋白(dysophin)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanai-cenolandcenosomeaibody,ACA試劑盒人抗中性粒/中心體抗體(ACA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物還原型(GSH)濃度比色法定量試劑盒50次
Humanα-Actinin3，ACTN-3ELISAKit人α-輔肌動(dòng)蛋白3(ACTN-3)試劑盒規(guī)格：96T/48T
巴豆酰組蛋白H2B重組兔單克隆抗體
酪激酶B單克隆抗體
RELT重組人 RELT / TNFRSF19L 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白
C. PERFRINGENS NA Protein C.perfringens 重組產(chǎn)氣莢膜梭菌 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)
胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白4(IGFBP4)重組蛋白 Recombinant Insulin Like Growth Factor Binding Protein 4 (IGFBP4)
EFNB1 Protein Human 重組人 Ephrin-B1 / EFNB1 蛋白
RELT重組人 RELT / TNFRSF19L 蛋白 (His & Fc 標(biāo)簽) Protein
C. PERFRINGENS NA Protein C.perfringens 重組產(chǎn)氣莢膜梭菌 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性)
HA重組甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 Protein
大鼠股骨頭微血管內(nèi)皮細(xì)胞大鼠白細(xì)胞介素2(IL-2)試劑盒 ，英文名： IL-2 ELISA Kit
Mouse macrophage inflammatory protein 2 (MIP-2) ELISA Kit 小鼠巨噬細(xì)胞性蛋白2(MIP-2)試劑盒
Mouseperoxisomeproliferatorsactivatorreceptorsalpha,PPAR-αELISAKit 小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit人不透光相關(guān)蛋白
同位素核酸蛋白結(jié)合反應(yīng)試劑盒20次
sAIL大鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性；
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂?。?/p>
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞；
2、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；
4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行
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