吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒

產(chǎn)品貨號：26330

產(chǎn)品規(guī)格：100T

產(chǎn)品簡介：

  細(xì)胞凋亡(Apoptosis)的檢測方法有形態(tài)學(xué)、生物化學(xué)、DNA的片段化檢測方法以及TUNEL等標(biāo)記片段化DNA 方法，但從細(xì)胞凋亡概念產(chǎn)生的歷史及準(zhǔn)確性方面考慮，使用顯微鏡進(jìn)行的形態(tài)學(xué)觀察也是很重要的。細(xì)胞死亡 的檢測可以通過熒光色素染色區(qū)分活細(xì)胞、死細(xì)胞，測定細(xì)胞代謝活性和形態(tài)學(xué)觀察。這些方法都是利用細(xì)胞凋 亡這種情況進(jìn)行測定的，因而不一定反映實(shí)際情況。MTT法是測定線粒體中*酶的活性，反映細(xì)胞數(shù)目的變化， 其結(jié)果與細(xì)胞死亡的數(shù)目未必*一致。

 吖啶橙/溴化乙錠雙熒光染色試劑盒(Acridine Orange, AO)屬于三環(huán)雜芳香燃料，可以標(biāo)記DNA、RNA,屬于異染性熒光染料，AO常用于 細(xì)胞內(nèi)DNA和RNA進(jìn)行檢測。AO與核酸結(jié)合方式主要有：1、插入性結(jié)合，AO嵌入核酸雙鏈的堿基對之間，這 種結(jié)合方式主要為AO與DNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為530nm，激發(fā)后呈綠色熒光；2、靜電吸引，帶正電荷的AO 與單鏈核酸的磷酸根(帶負(fù)電荷)產(chǎn)生靜電間的吸引結(jié)合，這種結(jié)合方式主要為AO與RNA的結(jié)合，其熒光發(fā)射峰為 640nm，激發(fā)后呈紅色熒光，少量結(jié)合會呈桔黃色或桔紅色熒光。因此，吖啶橙嵌合到雙鏈DNA分子中顯綠色， 與DNA單鏈或RNA結(jié)合時(shí)發(fā)橙紅色熒光。

  溴化乙錠(Ethidium Bromide,EB)嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對中，無堿基特異性，發(fā)紅色熒光。吖啶橙可 透過活細(xì)胞膜，EB不能通過與活細(xì)胞膜具有相同通透性的細(xì)胞膜。

產(chǎn)品內(nèi)容:

產(chǎn)品名稱 規(guī)格 保存溫度 試劑（A）：AO solution 200ul 4℃，避光 試劑（B）：EB solution 200ul 室溫 試劑（C）：AO/EB Dilution Buffer 50ml 4℃，避光

自備材料：

1. 熒光顯微鏡

2. PBS

3. 細(xì)胞計(jì)數(shù)板

4. 載玻片、蓋玻片

操作步驟（僅供參考）：

1. AO/EB工作液的配制：取試劑（A）、試劑（B）、試劑（C）,試劑（A）：試劑（B）：試劑（C）按照一 定的比例稀釋成AO/EB工作液。

2. 每份細(xì)胞樣品中加入AO/EB工作液，混合均勻。

3. 低速離心：離心，棄上清。

4. 用AO/EB Dilution Buffer重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)，將細(xì)胞密度調(diào)整。

5. 細(xì)胞懸液中，加入AO/EB工作液，充分混勻。

6. 取潔凈載玻片，滴加上細(xì)胞懸液，輕輕蓋上蓋玻片。

7. 在熒光顯微鏡B域進(jìn)行觀察。 染色結(jié)果： 活細(xì)胞 綠色熒光 死細(xì)胞 橙色熒光

注意事項(xiàng)：

1. 用能通過活細(xì)胞膜與DNA結(jié)合后發(fā)藍(lán)色熒光的Hoechist 33342和只能通過死細(xì)胞與DNA結(jié)合后發(fā)紅色熒光 的碘化吡啶( propidium iodide，PI)對細(xì)胞進(jìn)行雙染的方法也比較常用。

2. 如有低溫離心機(jī)進(jìn)行離心效果更佳。

3. 操作過程中應(yīng)注意減少試劑(A)、試劑(B)暴露于強(qiáng)光下的時(shí)間。

4. EB solution有一定毒性，請小心操作。

5. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：

6個(gè)月有效。