γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）檢測(cè)試劑盒（比色法）

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1790

產(chǎn)品規(guī)格：48T/96T

檢測(cè)原理：

γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?；衔锷系摩?/span>-谷氨酰基轉(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨?；衔锏乃?，產(chǎn)生谷氨酸鹽，在細(xì)胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰對(duì)硝基苯胺中γ-谷氨?；D(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸，生成對(duì)硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通過(guò)測(cè)定405nm光吸收增加速率，來(lái)計(jì)算γ-GT酶活性。

試劑組成：

需要而未提供的試劑和器材： 

可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。

樣本處理：

1. 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000rpm 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2. 組織：稱(chēng)取約0.1g樣品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm離心15min，取上清液待測(cè)。

3. 血清（漿）：直接檢測(cè)。

操作步驟： 

※正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至405nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于25℃（一般物種）或者37℃（哺乳動(dòng)物）水浴中預(yù)熱30min以上（保證無(wú)沉淀）。

3. 按順序加入下列試劑，完成測(cè)定。

活性計(jì)算： 

1. γ-GT活性計(jì)算：

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為一個(gè)活性單位。

γ-GT（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=0.506×ΔA÷Cpr

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為一個(gè)活性單位。

γ-GT（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷（W÷V提取×V樣）÷T=0.506×ΔA÷W

（3）按血清（漿）計(jì)算：

活性單位（U）定義：25℃或者37℃中，每毫升血清每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為一個(gè)活性單位。

γ-GT（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反總÷V樣÷T=0.506×ΔA

（4）按細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞計(jì)算：

單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生1μmol對(duì)硝基苯胺為一個(gè)活性單位。

γ-GT（U/10⁴cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁶÷(500×V樣÷V提取) ÷T=0.001×ΔA

V樣：加入樣品體積，0.1mL；V提?。杭尤胩崛∫后w積：1mL；T：反應(yīng)時(shí)間，2min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：500萬(wàn)細(xì)胞；ε：對(duì)硝基苯胺消光系數(shù)，9870L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.001L；10⁶：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=10⁶μmol

注意事項(xiàng)：

1. 培養(yǎng)細(xì)胞中γ-GT活性測(cè)定時(shí)，細(xì)胞中γ-GT的提取時(shí)可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細(xì)胞裂解液處理細(xì)胞（防止因?yàn)榈鞍踪|(zhì)變性導(dǎo)致酶失活）。