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如何獲得純凈且活性的膜蛋白
Rho1D4 tag / 1D4 tag
Rho1D4，也叫“1D4"，是一種親和標(biāo)記物，包含了九種氨基酸(T-E-T-S-Q-V-A-P-A)。該標(biāo)記物優(yōu)先與目標(biāo)蛋白的C端結(jié)合。瓊脂糖和磁珠與相對應(yīng)的Rho1D4-抗體能夠純化標(biāo)記了Rho1D4標(biāo)簽的蛋白。Rho1D4蛋白純化實驗不僅擁有基于其它抗體為基礎(chǔ)的蛋白純化特別高的專一特異性，并且蛋白的產(chǎn)量也很高。關(guān)于Rho1D4的更多信息，我們撰寫了一本指南為您提供所有必須信息。
產(chǎn)品技術(shù)參數(shù)
用途 | 特異性結(jié)合和純化Rho1D4標(biāo)記的蛋白 |
特異性 | 具有與Rho1D4標(biāo)記的蛋白親和力 |
穩(wěn)定性 | 高耐受去污劑 |
微球配基 | Rho1D4抗體 |
蛋白產(chǎn)量 | 3-4 mg/ ml瓊脂糖或磁珠 |
標(biāo)記序列 | TETSQVAPA |
為什么選擇庫柏生物（Cube Biotech）的Rho1D4 Tag蛋白純化產(chǎn)品?
選擇Cube Biotech公司的理由有很多。以下為其中幾點:
（1）標(biāo)記的大小：902.9 Da， 9個氨基酸(TETSQVAPA)
（2）每毫升樹脂蛋白產(chǎn)量：3-4 mg/ml
（3）相互作用的特異性：KD：20 nM
（4）洗脫條件：Rho1D4肽、低pH值或標(biāo)記裂解
Cube Biotech的Rho1D4親和蛋白純化的產(chǎn)品概覽：
Rho1D4 瓊脂糖 (40 µm) | Rho1D4 瓊脂糖 (40 µm) | Rho1D4 磁珠(30 µm) |
Rho1D4瓊脂糖(90µm大粒徑) | Rho1D4瓊脂糖 (40 µm) 通用型預(yù)裝柱 | Rho1D4磁珠 (大粒徑) |
Rho1D4 Starter試劑盒——面向所有想要嘗試Rho1D4標(biāo)簽的用戶。 | ||
Starter試劑盒 1 (1 mL 瓊脂糖 + 5 mg 肽) | Starter試劑盒3 (1 x 1 mL 預(yù)裝柱 + 5 mg 肽) | Starter試劑盒 2 (1 mL 磁珠+ 5 mg 肽) |
Starter試劑盒 4 (1 x 1ml 小型預(yù)裝柱 + 5mg 肽) |
Rho1D4蛋白純化支持產(chǎn)品:
Rho1D4 肽 (用于蛋白競爭洗脫) | Rho1D4 帶 GFP標(biāo)簽 (用于對照) | Rho1D4 抗體 [鼠源] (用于western blot) |
Cube Biotech的Rho1D4產(chǎn)品在以下論文刊物中出現(xiàn)：
高特異性和高產(chǎn)量的蛋白純化
PureCube系列瓊脂糖依據(jù)嚴(yán)格的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn)，每一批次均經(jīng)過質(zhì)量檢驗，以確保加載的基質(zhì)具有高蛋白載量。由于抗原-抗體表位相互作用的特異性，針對目標(biāo)蛋白優(yōu)化的純化操作流程可以產(chǎn)生高產(chǎn)量的洗脫組份。圖1 展現(xiàn)了趨化因子受體4（CXCR4）的純化過程。標(biāo)記的目標(biāo)蛋白在大腸桿菌中表達，用Fos-Choline®-14進行溶解，并在裝有PureCube Rho1D4瓊脂糖的預(yù)裝柱上進行純化。以Rho1D4肽作為洗脫劑，4個洗脫組分的蛋白質(zhì)總復(fù)原濃度為0.8、1.0、0.85和0.6mg/mL。通過western blot顯示CXCR4約在 65 kDa 和 35 kDa之間。這些條帶代表 39.7 kDa 膜蛋白的二聚體和單體。單體和二聚體的分離，就像去除洗脫肽的方式一樣，可以通過排阻層析的方式完成。
純凈且活性的膜蛋白
膜蛋白純化結(jié)果無法用更常用的瓊脂糖（如 Ni-NTA）進行保存。因此，Rho1D4是您獲得純凈且活性的膜蛋白可以選擇的方式。
圖1.使用 Rho1D4 標(biāo)記膜蛋白成功純化的考馬斯亮藍色染色。A：~65kDa的蛋白質(zhì)單體。B：~135kDA的四聚體。C： 異二聚體，均可見亞基，和一條較小的不可識別條帶。懷疑為降解產(chǎn)物。
References:
1. Mattle D. et al.(2015). Mammalian Expression, Purification, and Crystallization of Rhodopsin Variants. In: Jastrzebska B. (eds) Rhodopsin. Methods in Molecular Biology, vol 1271. Humana Press, New York, NY
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3. Ahmed, Chulbul M., et al. "SRD005825 Acts as a Pharmacologic Chaperone of Opsin and Promotes Survival of Photoreceptors in an Animal Model of Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa." Translational Vision Science & Technology 8.6 (2019): 30-30.
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5. Kotov, Vadim et al. (2019). High-throughput stability screening for detergent-solubilized membrane proteins. Scientific Reports. 9. 10.1038/s41598-019-46686-8.
