免疫組化實(shí)驗(yàn)看似容易，但真想把結(jié)果做漂亮，還是需要花上很長一段時(shí)間去積累和摸索經(jīng)驗(yàn)。一味按照網(wǎng)上操作流程來做，結(jié)果往往并不理想，最終結(jié)果未能達(dá)到預(yù)期的效果。那么如何選擇免疫組化實(shí)驗(yàn)中的一抗呢？讓我們一起來看看吧！
一、單克隆和多克隆抗體的選擇
存在于抗原表面的，決定抗原特異性的特殊化學(xué)基團(tuán)稱為抗原決定簇，又稱抗原表位。一個(gè)抗原可以有一種或多種不同的抗原表位，每種表位只有一種抗原特異性。
用一種包含多種抗原決定簇的抗原免疫動(dòng)物，可刺激機(jī)體多個(gè) B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生針對多種抗原表位的抗體，就是多克隆抗體（polyclonal antibody, pAb）。由單一 B 細(xì)胞克隆產(chǎn)生的識(shí)別一種抗原表位的抗體，稱為單克隆抗體（monoclonal antibodies, mAb）。
在抗原抗體反應(yīng)中，一般單克隆抗體特異性強(qiáng)，切片和細(xì)胞染色產(chǎn)生的背景信號(hào)更少，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強(qiáng)，因?yàn)椴灰蕾噯我槐砦?，因此其對微小抗原變化（例如多態(tài)性、糖基化異質(zhì)性或者輕微變性）的包容性更強(qiáng)，靈敏度高，但易出現(xiàn)非特異性染色（可以通過封閉等避免）。
二、應(yīng)用范圍的選擇
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting）或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等，必須選擇能做免疫組化的抗體。
三、適用種屬的選擇
這一點(diǎn)很重要，你的目的是檢測哪個(gè)種屬樣本，就必須選擇能檢測該種屬的抗體，因?yàn)榭贵w在不同種屬間存在差異。
四、宿主來源
宿主來源，一般兔來源的多是多克隆，也有兔單克??；而小鼠來源的多是單克隆。需要根據(jù)一抗宿主來源來選擇相應(yīng)的二抗。
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