你知道該如何配置培養(yǎng)基嗎?讓我們一起來看看吧!
一、細(xì)胞實驗全程注意事項
1.無菌操作是重中之重,細(xì)胞培養(yǎng)對無菌條件比較苛刻,實驗人在進(jìn)行整個細(xì)胞實驗的無菌意識一定要強,否則一個不小心,發(fā)生細(xì)菌污染,輕則浪費細(xì)胞,重則污染整個培養(yǎng)箱。
2.實驗人員進(jìn)入細(xì)胞房前應(yīng)該換上干凈的鞋子、白大褂、手套和口罩。
3.所有耗材放入工作臺前都需用75%酒精進(jìn)行消毒,雙手進(jìn)入工作臺前也需要用75%的酒精進(jìn)行消毒。
4.進(jìn)行實驗前應(yīng)先對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上,并將所有需要用到的耗材放到工作臺上一起進(jìn)行紫外滅菌(簡稱照臺)。
5.使用酒精燈的實驗室需要特別注意安全,剛噴灑完酒精的物品不要靠近酒精燈,有生物安全柜的實驗室則不需要使用酒精燈。
6.進(jìn)行實驗前應(yīng)先用酒精棉擦拭工作臺,所有操作都應(yīng)在靠近酒精燈火焰下方進(jìn)行(有生物安全柜的則不需要使用酒精燈)。
7.實驗結(jié)束后應(yīng)及時將垃圾處理,再用酒精棉擦拭工作臺,對工作臺進(jìn)行紫外滅菌30min以上。
二、配制基礎(chǔ)培養(yǎng)基
1. 準(zhǔn)備材料:
50mL離心管、封口膜、鑷子、移液槍、DMEM培養(yǎng)液、雙抗、胎牛血清等。
2. 操作步驟:
(1)用移液槍吸取44mL的DMEM培養(yǎng)液,轉(zhuǎn)移至離心管中。注意槍頭不要碰到培養(yǎng)液瓶口。
(2)用移液槍吸取1mL的雙抗,轉(zhuǎn)移至離心管中,吹打混勻。
(3)用移液槍吸取5mL的胎牛血清,轉(zhuǎn)移至離心管中,吹打混勻。
(4)用封口膜將離心管封口,置于4℃保存。
(5) 雙抗、胎牛血清置于-20℃長期保存,置于4℃短期保存。
(6)DMEM培養(yǎng)液置于4℃保存。
3. 注意事項:
(1)配制好的培養(yǎng)基盡快使用,一般可存放三個月左右,放置久了里面的物質(zhì)可能會失活,培養(yǎng)出來的細(xì)胞狀態(tài)就不這么好了。
(2)使用移液槍時,注意槍頭不要碰到任何東西,如果碰到了,不要猶豫馬上丟棄。
(3)雙抗、胎牛血清應(yīng)避免反復(fù)凍融,可根據(jù)需要將其分裝保存。
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