EZBioscience® microRNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒采用一步法中的Poly（A）拖尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)方法合成miRNA的第一鏈cDNA。通過使用大腸桿菌Poly（A）聚合酶通過添加Poly（A）來(lái)延長(zhǎng)成熟轉(zhuǎn)錄本的3' 端，修飾來(lái)自總RNA的成熟miRNA。然后，修飾的miRNA使用Oligo（dT）通用標(biāo)簽引物進(jìn)行通用逆轉(zhuǎn)錄，以合成所有miRNA的第一鏈cDNA。其中，gDNA Remover主要包括濃縮的DNase和緩沖液。只需在室溫（19~27°C）下反應(yīng)5分鐘即可降解95%以上的殘留基因組DNA，大大降低了對(duì)結(jié)果的干擾。
miRNA RT 酶混合物主要包含大腸桿菌 Poly（A）聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶和 RNase 抑制劑。大腸桿菌Poly（A）聚合酶不僅具有高效的Poly（A）拖尾反應(yīng)效率，而且特異性識(shí)別成熟的單鏈miRNA，從而避免了雙鏈結(jié)構(gòu)miRNA前體的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。突變體M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶具有很強(qiáng)的抗干擾能力和擴(kuò)增能力。
4×miRNA RT緩沖液試劑包含Poly（A）拖尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的所有原料和引物，包括 Oligo（dT）-通用標(biāo)簽引物、緩沖液和dNTP，并經(jīng)過精心優(yōu)化，確保 Poly（A）拖尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)高效。
1.操作快速簡(jiǎn)單：本試劑盒采用Poly（A）拖尾反應(yīng)和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)法一步法合成miRNAs第一鏈cDNA。無(wú)需設(shè)計(jì)額外的逆轉(zhuǎn)錄引物。30 分鐘內(nèi)即可獲得包含所有 miRNA 的高質(zhì)量 cDNA。
2.特異性高：Poly（A）聚合酶不僅具有較高的A-tailing效率，而且特異性識(shí)別成熟的單鏈miRNA，從而避免了雙鏈結(jié)構(gòu)miRNA前體的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
3.高效：該試劑盒采用高效Poly（A）聚合酶和逆轉(zhuǎn)錄酶的優(yōu)化組合，可高效進(jìn)行Poly（A）拖尾和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。與普通商業(yè)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品相比，該試劑盒以最小的定量CT值逆轉(zhuǎn)cDNA，具有優(yōu)異的逆轉(zhuǎn)錄效率。
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