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一、產(chǎn)品簡介

BrainBits小鼠全腦培養(yǎng)試劑盒，提供完整的培養(yǎng)服務(wù)，包含從新鮮組織開始培養(yǎng)所需的一切。E18組織用2ml含B27的THRYVE胚胎儲存介質(zhì)運送。立即使用組織能獲得最高的細(xì)胞產(chǎn)量，但注意組織可在4-8°C下保存一周。這個試劑盒是研究人員為下一代研究人員提供剛剛開始的可能性的實踐方法，十分適用于科研。

★產(chǎn)品組分：1 E18小鼠全腦、12mL NbAstro、6.2mg木瓜蛋白酶、5mL HE-Ca 、1個帶橡膠球的火拋光移液、1對PDL涂層蓋板。

二、產(chǎn)品使用

（一）制劑（無菌罩室溫）

1. 將6mg無菌木瓜蛋白酶（PAP 6mg）溶解于3ml THRYVE Embryonic-CaCl中，制備細(xì)胞解離液，最終工作濃度為

2毫克/毫升木瓜蛋白酶。在30℃下孵育10分鐘使其溶解。放入冰箱或冰中備用。組織和木瓜蛋白酶必須處于相同的溫度

（根據(jù)處理組織的數(shù)量，可能需要幾個單位）。

2. 將80µl臺普蘭藍(lán)（Sigma T8154）加入0.5ml試管中進(jìn)行第9步。

（二）細(xì)胞分散（無菌罩室溫）：

1. 用2ml移液管，用最少的培養(yǎng)基小心地將組織轉(zhuǎn)移到木瓜蛋白酶上。將THRYVE胚胎wanquan移植到一個新的無菌15ml試管中

保存到步驟3。

2. 組織與木瓜蛋白酶在30℃下孵育10分鐘。輕輕地旋轉(zhuǎn)每2分鐘或使用加熱搖振板在30℃和150rpm。

3. 用2ml移液管從木瓜蛋白酶中除去帶有少量培養(yǎng)基的組織，并從步驟1中返回THRYVE胚胎wanquan培養(yǎng)基。

4. 使用硅化巴斯德移液器，將組織分散不超過10倍或90%，避免產(chǎn)生氣泡?？蛇x：加入400µl 1mg/ml DNase I溶液（StemCell Technologies 07469）加入細(xì)胞漿液中，在室溫下孵育15分鐘，輕彈或旋轉(zhuǎn)。

5. 讓未分散的碎片靜置1分鐘。

6. 將含有分散細(xì)胞的上清液轉(zhuǎn)移到15ml無菌管中。留下約50μl含有碎片的THRYVE胚胎wanquan體?？蛇x用70µm濾池過濾細(xì)胞液。

7. 旋轉(zhuǎn)1100rpm (200 x G) 1分鐘。丟棄上清，留下含有微球的約50μl THRYVE胚胎wanquan液。

8. 分散細(xì)胞顆粒（用手指或管輕彈管底部），重懸于1ml NbActiv1™中。

9. 取20μl細(xì)胞液加入含有80μl臺盼藍(lán)（1:5稀釋）的0.5ml試管中，或按實驗室現(xiàn)行計數(shù)程序計數(shù)。

10. 使用血細(xì)胞計（計算細(xì)胞/ml）或使用當(dāng)前的實驗室程序計數(shù)細(xì)胞。

（三）細(xì)胞電鍍（無菌罩室溫）：

1. 用NbActiv1™稀釋0.2ml/cm2的細(xì)胞，并以16,000個細(xì)胞/cm2或所需濃度進(jìn)行板載。

2. 37℃，5% CO2, 9% O2, 95%濕度（或環(huán)境O2）孵育。

3. 4天后，神經(jīng)元顯示軸突和樹突；突觸和動作電位開始于7天。

4. 每3-4天用新鮮的37℃CO2平衡NbActiv1™更換一半的培養(yǎng)基。

（四）可行性分析:

1. 用37℃HBSS （0.2ml/cm2底物）沖洗兩次。

2. 用15mg/ml雙醋酸熒光素丙酮原液和4.6mg/ml碘化丙啶水原液配制染料混合物，各稀釋15µl，加入1.5ml HBSS（1:100稀釋）。

3. 在步驟1中加入的0.2ml HBSS中加入20µl染料混合物（1:10稀釋）。

4. 約1分鐘后，使用適合熒光素?zé)晒獾乃{(lán)色激勵（綠色細(xì)胞）計數(shù)活細(xì)胞。用綠色激勵計數(shù)死細(xì)胞碘化丙啶熒光（小紅核）。

5. 生存能力=（綠色細(xì)胞/單位面積）/（總細(xì)胞數(shù)/單位面積）或生存=綠色細(xì)胞/（綠色+紅色細(xì)胞）。

三、產(chǎn)品目錄表

三、代理簡介

BrainBits小鼠全腦培養(yǎng)試劑盒——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價美的產(chǎn)品、及時到位的服務(wù)，努力成長為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。