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檢測原理：試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被類總黃酮（flavone）抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的類總黃酮（flavone）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法：植物總黃酮(flavone)ELISA檢測試劑盒

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行。

3.  植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。

4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

洗板方法：手工洗板方法：甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復此過程數(shù)次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

植物總黃酮(flavone)ELISA檢測試劑盒注意事項：

1） 充分混勻?qū)ΡＷC反應結果很重要，在加液后請輕輕晃動整個96板孔，以保證混勻。

2） TMB溶液請勿接觸氧化劑或金屬，否則容易失效。

3） 加樣時請注意每個樣品或標準品必須更換槍頭，一方面避免交叉污染，另一方面也避免吸取體積的誤差。加樣過程中必須避免氣泡的產(chǎn)生。

4） 檢測標準品和樣品時建議設置重復孔，以確保檢測結果的可信度。

5） 洗滌過程非常重要，洗滌不充分會下降并導致結果誤差較大。

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