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尿素(Urea)又稱碳酰胺(carbamide)，是哺乳動物和某些魚類體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝分解的主要含氮終產(chǎn)物，也是目前含氮量最高

的氮肥；尿素檢測方法大致分為化學(xué)方法和酶學(xué)方法，后者被認為是間接方法，先經(jīng)尿素酶(脲酶)分解尿素為銨離子，

然后根據(jù)波氏反應(yīng)檢測銨離子的生成量。

尿素(Urea)檢測試劑盒(脲酶波氏比色法)檢測原理是尿素酶水解尿素，產(chǎn)生氨和二氧化碳，氨在堿性條件下與

等反應(yīng)生成藍色吲哚酚，吲哚酚的生成量與尿素含量呈正比，通過酶標儀測定560nm處吸光度，該試劑盒可用于測定

人體、動物的血漿、血清、尿液等樣品中尿素(舊稱尿素氮，BUN)含量，但尿液最好經(jīng)過處理后再行檢測。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內(nèi)徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內(nèi)血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區(qū)間： (1.77±0.76)min

4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使?jié)舛冗_到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應(yīng)盡量新鮮，如取材后不立即使用，應(yīng)存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應(yīng)用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應(yīng)采用電位滴定法。

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