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堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi)，其活性所需最適pH 9.2~9

.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及

微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮，還見(jiàn)于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及

平滑肌的細(xì)胞膜。

同工酶檢測(cè)試劑盒(熱穩(wěn)定性法)(Alkaline Phosphatase Colorimetric Assay Kit)采用PNP比色法，其檢測(cè)原理是

Para-nitrophenyl phosphate (pNPP)為一種常用的磷酸酶顯色底物，在酸性條件下，可在堿性磷酸酶的作用下生成

p-nitrophenol；在堿性條件下p-nitrophenol轉(zhuǎn)變成醌式結(jié)構(gòu)，呈較深的黃色，產(chǎn)物黃色越深說(shuō)明堿性磷酸酶活性越高，

反之則酶活性越低，通過(guò)比色法(酶標(biāo)儀)測(cè)定400～415nm處吸光度，據(jù)此通過(guò)比色分析就可以計(jì)算出堿性磷酸酶活性水平

，可用于檢測(cè)細(xì)胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的堿性磷酸酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域

，不適用于臨床診斷或其他用途。

計(jì)算：堿性磷酸酶金氏活性單位的定義：在 37℃條件下，100ml 待測(cè)樣品與顯色底物(即 ALP

顯色液所含物質(zhì))作用 15min，產(chǎn)生 1mg 酚為一個(gè)金氏單位。

以系列 Phenol 標(biāo)準(zhǔn)(1～6 號(hào))對(duì)應(yīng)的金氏單位(5、10、20、30、40、50U/L)為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)

的 A 標(biāo)準(zhǔn)(1～6 號(hào))為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以 A 測(cè)定-A 對(duì)照的差值為實(shí)際的吸光度，用

該差值與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行對(duì)比，求出酶活力單位。

參考區(qū)間(37℃)：

健康成年人 3～13 金氏單位

健康兒童 5～28 金氏單位

注意事項(xiàng)：

1、待測(cè)樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時(shí)需避免反復(fù)凍融。

2、如果沒(méi)有酶標(biāo)儀，也可以使用分光光度計(jì)測(cè)定，但應(yīng)注意 96 孔板最大檢測(cè)體積。

3、所測(cè)樣品的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

4、空白孔如果顯紅色，說(shuō)明 ALP 顯色液不可用，應(yīng)丟棄。

5、加入顯色基液時(shí)應(yīng)迅速，并且及時(shí)混勻，否則顯色不充分。

6、如無(wú)法檢測(cè) 510nm，亦可檢測(cè) 500～530nm 范圍內(nèi)吸光度。

7、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

附錄：參考標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍：測(cè)定 Phenol 標(biāo)準(zhǔn)在 5~50U/L 金氏單位時(shí)，通過(guò)酶標(biāo)儀 505nm 測(cè)

定其吸光度多在 0.1~1.0 之間，標(biāo)準(zhǔn)曲線參考如下：

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