Proteintech  PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品貨號：PK10030

產(chǎn)品名稱：通用型總蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格： 50T/100T

產(chǎn)品簡介：

Proteintech 通用型總蛋白提取試劑盒（PK10030）適用于提取各種動物、植物的細(xì)胞或組織樣品中的總蛋白，也可以用于真菌或細(xì)菌樣品中的總蛋白的提取，此款試劑盒提供的裂解液，能夠高效地提取總蛋白，主要包括細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜、細(xì)胞核、核基質(zhì)、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體等蛋白，得到的總蛋白樣品可用于蛋白免疫印跡、免疫沉淀、Co-IP、ELISA檢測，蛋白質(zhì)分析和小規(guī)模蛋白層析純化等其他應(yīng)用。

 具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品說明：

關(guān)于試劑盒

●本試劑盒是一款廣譜、通用型的總蛋白的提取試劑盒，可用于大部分蛋白的提??；而對于一些低表達(dá)、易降解、磷酸化修飾、疏水性蛋白等特殊蛋白質(zhì)的提取推薦選用其對應(yīng)的專用提取試劑盒（見下表）。

●用于Co-IP實驗的樣品不要對樣品進(jìn)行超聲波處理，也可將裂解液換成專用的Co-IP裂解液（PR20037），提升提取效果。

●裂解液在使用前需添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物。

●樣品制備完成后及時使用或分裝保存在-80℃。

●試劑盒開封后，裂解液可長期保存于4-8℃，SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液（4X）推薦分裝-20℃保存，試劑盒過期后建議不要使用。

使用方法

1、細(xì)胞樣品

a、瓶內(nèi)裂解法（效果zui 佳）：適用于所有的貼壁細(xì)胞

  （1）吸凈培養(yǎng)基，用冰的PBS清洗細(xì)胞表面2遍（動作輕柔，防止細(xì)胞脫落），盡可能吸取殘留的PBS。

（2）在冰上按每1000萬細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物）于細(xì)胞瓶、培養(yǎng)板或培養(yǎng)皿中，用移液管吹散貼壁的細(xì)胞，對于貼壁緊的細(xì)胞也可使用細(xì)胞刮收集，收集裂解液，在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

b、離心法：適用于懸浮細(xì)胞和藥物處理過的細(xì)胞

（1）使用細(xì)胞刮收集細(xì)胞懸液（連同培養(yǎng)基一起收集），4℃，500 g離心5 min，收集沉淀，沉淀用預(yù)冷的PBS洗滌兩遍，收集細(xì)胞沉淀，盡可能吸取殘留的PBS。

（2）按每1000萬細(xì)胞加入1 mL預(yù)冷的裂解液，在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

注：（1）細(xì)胞的收集優(yōu)先使用瓶內(nèi)裂解法處理，瓶內(nèi)裂解法可以有效的防止細(xì)胞在離心過程中破碎，能有效地提高總蛋白得率，同時也能保留細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）。

（2）對于藥物處理過的貼壁細(xì)胞則推薦使用離心法收集，因為藥物處理過的細(xì)胞往往貼壁不牢，在PBS清洗階段容易丟失。

（3）不推薦使用yi酶消化，yi酶消化細(xì)胞不僅會造成細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）的wan全丟失，同時會剪切一些對yi酶敏感的蛋白。

（4）一些細(xì)胞粘度高（HEK-293）和密度高的懸浮細(xì)胞（Jurkat、K562等）在加入細(xì)胞裂解液后容易形成絮狀物，此時應(yīng)及時的使用超聲破碎儀將其打散。

2、組織樣本

a、采集與保存：

（1）采集組織樣本前先對動物去除血液（血液去除越干凈越好），接著迅速解剖，采集所需要的組織樣本。

（2）組織樣本如需保存，可將采集的組織樣本液氮速凍，然后轉(zhuǎn)移至-80℃保存。

（3）取樣順序：最先取胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織，接著取肺（巨噬細(xì)胞含量高）、肝臟（蛋白種類多）、膀胱、生殖系統(tǒng)相關(guān)的組織（睪丸、卵巢、子宮、輸卵管等），最后取心臟、脾臟、腎臟、骨骼肌、大小腦等組織。胃腸道消化系統(tǒng)相關(guān)組織推薦現(xiàn)取現(xiàn)制備，選用易降解蛋白提取試劑盒（PK10024)提取。

b、清洗

（1）對于血液含量豐富的組織樣本如：心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟等組織，剪碎使用冰的PBS洗滌液清洗2-3遍（可以適當(dāng)按壓排出血液），直至樣本血紅色變淺，濾紙吸干水分稱重。

（2）對于脂肪含量豐富的組織樣本，預(yù)先把樣本放在幾層紙巾上按壓，去除部分脂類，然后再使用冰的PBS清洗1-2遍，濾紙吸干水分稱重。

c、破碎及裂解

（1）液氮研磨法：將剪碎的組織塊在研缽中加入液氮，快速研磨至細(xì)粉狀，轉(zhuǎn)移至EP管中，按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），使用移液器上下吹打混勻，直至wan全溶解。在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

  （2）勻漿法：按每100 mg組織加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），將樣品轉(zhuǎn)移到合適大小的預(yù)冷玻璃勻漿器中，在冰浴條件下對樣品勻漿30-50次。在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

注：不同的樣品所需勻漿次數(shù)不同。鑒定方法：取20 ul勻漿30次后的組織樣品，加入等體積的0.4%臺盼藍(lán)溶液，混勻，在顯微鏡下觀察臺盼藍(lán)溶液染色陽性（藍(lán)色）細(xì)胞數(shù)目的比例，當(dāng)陽性（藍(lán)色）細(xì)胞wan全破碎，即可停止勻漿。若陽性（藍(lán)色）細(xì)胞破碎不wan全，則可適當(dāng)增加5-10次勻漿，隨后按照同樣的方法使用臺盼藍(lán)溶液進(jìn)行鑒定。

 （3）冷凍研磨機(jī)法：提前開啟冷凍研磨機(jī)預(yù)冷，將吸干水分的組織樣本剪成1-2 mm左右的小塊，按照每管100 mg分裝到2 mL離心管，同時每管加入1粒5 mm的研磨珠。將離心管和適配器放入液氮里浸泡速凍。將離心管和適配器轉(zhuǎn)移到冷凍研磨機(jī)，使用65 Hz研磨45s，如果研磨效果不理想可中斷15s后重復(fù)研磨一次。每管加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），使用移液器上下吹打混勻，直至wan全溶解。在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

注：（1）優(yōu)先推薦選用液氮研磨法和冷凍研磨機(jī)法，其破碎效果zui 佳；如選用勻漿法，需在冰水浴中對樣品進(jìn)行勻漿。

（2）使用冷凍研磨機(jī)法對液氮速凍過的樣本進(jìn)行破碎，對離心管的材質(zhì)要求比較高，需選用專用的離心管。

3、昆蟲樣本

     將昆蟲清洗干凈，使用液氮研磨法、勻漿法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎，按每50-100 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

4、植物樣本

   將植物清洗干凈，使用液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法（參考組織樣本的破碎及裂解方法）將其破碎（越碎越好），按每100-200 mg樣本加1 mL預(yù)冷的裂解液（使用前添加新鮮的蛋白酶抑制劑混合物），在冰上放置30 min，期間每10 min上下顛倒混勻一次。

   注：植物樣本不推薦使用勻漿法，液氮研磨法或冷凍研磨機(jī)法中液氮對破碎植物的細(xì)胞壁有非常好的效果。

5、超聲處理

   將裂解的蛋白樣品放在冰上超聲破碎，200W，2 min（開2s，關(guān)2s），充分打斷核酸序列（用于Co-IP實驗的樣品不要對樣品進(jìn)行超聲波處理）。

6、樣品的使用與保存。

6.1  用于免疫沉淀、ELISA等非變性蛋白分析實驗，4℃，10000 g離心5 min分離上清，取部分樣品用來測濃度，剩下的蛋白樣品可直接分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃。

6.2  用于免疫印跡的變性蛋白分析實驗，取部分樣品用來測濃度，剩下的蛋白樣品按照3:1比例，混合蛋白樣品和SDS-PAGE上樣緩沖液。100℃沸水浴加熱5 min，以充分變性蛋白。冷卻至室溫后，4℃，10000 g離心5 min分離上清，可直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔或分成數(shù)管保存在-20℃或-80℃。

注：用于免疫印跡的變性蛋白分析，在加入SDS-PAGE上樣緩沖液煮樣后再離心，可提高總蛋白的得率。

Proteintech  通用型總蛋白提取試劑盒-常備現(xiàn)貨

產(chǎn)品訂購信息：

PK10030  通用型總蛋白提取試劑盒  50T/100T

PK10021  動物組織總蛋白提取試劑盒  30T