在液相色譜分析中，反相色譜柱 (如Hypersil GOLD C18) 對強極性或可電離化合物的保留較弱，而離子交換色譜柱 (如Hypersil GOLD SAX) 則對疏水性強的化合物的保留不足。賽默飛科學家通過將離子交換與反相或親水作用的官能團創(chuàng)新結合，在反復試驗并不斷優(yōu)化后，賽默飛混合模式色譜柱應運而生。
與傳統(tǒng)的反相、親水作用和離子交換色譜柱的單一保留模式相比，賽默飛Acclaim系列混合模式色譜柱的創(chuàng)新型鍵合相，具有du特的表面化學結構，能夠提供特殊的多重保留機制，最大限度的優(yōu)化選擇性。通過調節(jié)緩沖鹽濃度、pH 值及有機相比例，在Acclaim系列混合模式色譜上，可實現同時保留強極性、中等級性和弱極性組分，也可以同時分離酸性、堿性和中性化合物。
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認識賽默飛Acclaim系列
混合模式色譜柱
Acclaim Mixed-Mode 系列為雙重混合模式 (Bi-modal)，Acclaim Trinity 系列為三重混合模式 (Tri-modal)，色譜柱混合機制如圖1 所示。在美國藥典(USP)色譜柱分類中，Acclaim Mixed-Mode WAX-1和WCX-1分別歸屬于L78和L85。
圖 1 Acclaim Mixed-Mode 系列和Acclaim Trinity 系列色譜柱多重混合機制示意圖（點擊查看大圖）
1.1 Acclaim Mixed-Mode 系列
Acclaim Mixed-Mode 系列混合模式色譜柱能夠在單一鍵合相上提供多種保留機制，選擇性與 C18 反相色譜柱互補。
Acclaim Mixed-Mode WAX-1鍵合相為帶有叔胺末端的疏水烷基鏈鍵合硅膠，疏水烴鏈提供反相保留 (RP)，叔胺端基提供弱陰離子交換 (WAX)，適用于酸性化合物分析，如含羧酸、磺酸官能團結構，有機酸類。
Acclaim Mixed-Mode WCX-1鍵合相為帶有羧基末端的疏水烷基鏈鍵合硅膠，疏水烴鏈提供反相保留 (RP)，羧基端基提供弱陽離子交換 (WCX)，適用于堿性化合物分析，如含伯仲叔胺及季銨結構，有機胺類、含氮雜環(huán)結構。
Acclaim Mixed-Mode HILIC-1鍵合相為帶有二醇基末端的疏水烷基鏈鍵合硅膠，疏水烴鏈提供反相保留 (RP)，二醇基端基提供親水作用 (HILIC)，適用于極性和非極性化合物的分離。
圖 2 Acclaim Mixed-Mode 系列雙重混合模式色譜柱鍵合相示意圖（點擊查看大圖）
賽默飛小貼士
Acclaim Mixed-Mode WAX-1 / WCX-1 色譜柱必須始終使用含有緩沖鹽的流動相進行活化、分析或保存；
Acclaim Mixed-Mode WCX-1 禁止使用醇類作為樣品溶劑或流動相。
1.2 Acclaim Trinity 系列
Acclaim Trinity 系列混合模式色譜柱基于 Nanopolymer Silica Hybrid (NSH，納米聚合物硅膠雜化) 技術，其設計旨在使方法開發(fā)能夠取得最大的靈活性。全多孔裸硅膠通過共價修飾鍵合上具有雙重混合模式的官能團，使得硅膠表面帶上電荷，而帶相反電荷的聚合物微球通過靜電驅動自組裝工藝與改性硅膠進行雜化，得到Acclaim Trinity三重混合模式。NSH技術可以確保內孔區(qū)和外表面具有明確的空間分隔，內外電荷屬性相反，從而使其同時具有兩種離子交換保留機制，并可獨立控制。
Acclaim Trinity P1硅膠內孔區(qū)弱陰離子交換和反相保留 (WAX/RP)，聚合物外表面強陽離子交 (SCX)；Acclaim Trinity P2硅膠內孔區(qū)弱陽離子交換和親水作用 (WCX/HILIC)，聚合物外表面強陰離子交換(SAX)；Acclaim Trinity Q1硅膠內孔區(qū)弱陰離子交換和反相保留 (WAX/RP)，聚合物外表面弱陽離子交換 (WCX)。
Acclaim Trinity 系列混合模式色譜柱適用于強極性化合物及離子的分析，Trinity P1與Trinity P2選擇性互補，為活性藥物成分與對離子分析提供全面的解決方案。
圖 3 Acclaim Trinity 系列三重混合模式色譜柱鍵合相示意圖（點擊查看大圖）
賽默飛小貼士
Acclaim Trinity P1 / P2 / Q1 色譜柱必須始終使用含有緩沖鹽的流動相進行活化、分析或保存；
Acclaim Trinity P2 / Q1 禁止使用醇類作為樣品溶劑或流動相；
在使用過程中應避免頻繁大幅度的切換流速，否則會導致柱壓激增，損傷柱床。
1.3 Acclaim系列混合模式色譜柱理化參數
表 1 Acclaim系列混合模式色譜柱理化參數
（點擊查看大圖）
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賽默飛Acclaim系列
混合模式色譜柱典型應用
由于反相離子對色譜法，方法穩(wěn)定性差，對色譜柱損傷大，且與質譜不兼容，在接下來探討酸性堿性化合物分離保留時，該方法已被排除在外，不在討論之列。
反相液相色譜法分離保留酸性化合物(有機酸)的機制，主要是通過低pH (pKa-2)、高比例水相流動相來實現。低pH可抑制酸性化合物電離，降低目標物極性，高比例水相可減弱流動相洗脫強度，增強反相保留，從而達到分離的目的。當方法轉移至LC-MS/MS時，流動相會添加0.1%甲酸來增強反相保留，而酸性化合物采集模式為負模式，甲酸的引入勢必會抑制負模式的響應。同理，反相液相色譜法分離保留堿性化合物(生物堿)時，通常會選擇高pH (pKa+2) 流動相來增強反相保留。針對液質方法，流動相一般會添加0.2‰的氨水，同時也會抑制正模式的響應。
因此，液質方法在分析酸性或堿性化合物時，會出現保留與響應難以兼顧的情形，而液相方法在同時分析酸性和堿性化合物時，會顯得捉襟見肘。另外，流動相較高或較低的pH，對反相色譜柱及液相系統(tǒng)的耐受性帶來了新的考驗。
采用Acclaim系列混合模式色譜柱分析酸性或堿性化合物時，可選擇較為“溫和"的流動相條件進行試驗，如乙腈-25mM磷酸氫二銨(pH=5.0)或乙腈-50mM乙酸銨(pH=5.0)，配合調節(jié)緩沖鹽濃度、pH 值、有機相比例及柱溫，即可快速完成液相色譜條件的優(yōu)化。目標物特征吸收接近紫外端，可選擇磷酸緩沖鹽；配合質量型檢測器時，須選擇揮發(fā)性緩沖鹽；調節(jié)緩沖鹽濃度及有機相比例時，應避免出現鹽析。在整個方法開發(fā)過程中，無須使用離子對試劑，與質譜兼容性較高，可輕松實現方法轉移，在食品極性農獸殘分析及藥物極性雜質譜研究中有著廣泛的應用前景。
2.1 酸性/堿性化合物的分析
圖 4 Acclaim Mixed-Mode WAX-1應用于一元羧酸的分離（點擊查看大圖）
圖 5 Acclaim Mixed-Mode WAX-1等度洗脫同時分離堿性、中性和酸性藥物（點擊查看大圖）
圖 6 Acclaim Mixed-Mode WCX-1 應用于季銨鹽類的分離（點擊查看大圖）
圖 7 Acclaim Mixed-Mode WCX-1等度洗脫同時分離堿性、中性和酸性藥物（點擊查看大圖）
圖 8 Acclaim Mixed-Mode WAX-1 應用于 L-抗壞血酸和 D-異抗壞血酸的分離（點擊查看大圖）
圖 9 Acclaim Mixed-Mode WAX-1 應用于 L-抗壞血酸和 L-抗壞血酸-2-葡萄糖苷的分離（點擊查看大圖）
圖 10 Acclaim Mixed-Mode WCX-1 應用于多奈哌齊及其代謝物的分離（點擊查看大圖）
2.3 強極性化合物的分析
圖 11 Acclaim Trinity P1 應用于生活飲用水中碘乙酸、二lv乙酸和三lv乙酸的測定（點擊查看大圖）
圖 12 Acclaim Trinity P1 應用于陽離子（矮壯素和助壯素）和陰離子（氯酸根和高氯酸根）極性農藥的同時測定（點擊查看大圖）
圖 13 Acclaim Trinity P1 應用于強極性農藥草甘膦、草銨膦及其代謝物的測定（點擊查看大圖）
2.4 活性藥物成分與對離子分析
圖 14 Acclaim Mixed-Mode WAX-1 & WCX-1 分析馬來酸曲米帕明API及對離子時的正交選擇性（點擊查看大圖）
圖 15 Acclaim Trinity P1 同時分離藥物及其對離子（點擊查看大圖）
圖 16 Acclaim Trinity P2 同時分析藥物中的陰、陽離子（點擊查看大圖）
本期內容主要介紹了賽默飛Acclaim系列混合模式色譜柱的理化性質及典型應用，下一期我們將進一步探討混合模式方法開發(fā)過程中的色譜柱選擇及色譜條件優(yōu)化細節(jié)，敬請期待！
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