Bio-rad微滴式數(shù)字PCR（DDPCR）技術(shù) 

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革命性的微滴式數(shù)字

 PCR技術(shù),使實體瘤腫瘤負荷的血清學定量分析成為可能   

Revolutionary Droplet Digital PCR,Enable Absolute Quantification of Serum Tumor Burden   技術(shù)原理   

微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理，即將含有核酸分子的反應體系分成數(shù)萬個納升級的微滴，其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子，或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后，對每個微滴的熒光信號進行逐一分析，有熒光信號的微滴判讀為1，沒有熒光信號的微滴判讀為0，根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。   

技術(shù)優(yōu)勢   

通過把樣本稀釋成許多部分，然后在一個反應發(fā)生的時候?qū)ζ溥M行計數(shù)。其靈敏度高達0.001%，顯著高于擴增阻滯突變系統(tǒng)（0.1%）和Sanger法測序（10%）。同時能克服核酸降解的不利影響，非常適合一些稀有樣本中核酸的精確檢測。   

高靈敏度、高特異性檢測復雜背景下的靶標序列   

靈敏度可達0.001%，樣本珍貴或者樣本核酸存在降解時的*選擇。在穿刺樣本、胸腹水、外周血中即可完成靶標序列的檢測。   

所需樣本量少   

200ul血漿或1ml全血/  2-3片白片/  納克級活檢組織。   

實驗數(shù)據(jù)分析便捷   

每個微滴的檢測結(jié)果以陰性、陽性判讀，數(shù)據(jù)分析自動化。   

可統(tǒng)計突變率   

真正意義上的定量，通過統(tǒng)計分析可得出靶點的突變率。   

臨床應用   

腫瘤早期篩查   

微滴式數(shù)字PCR技術(shù)作為迄今為止zui靈敏的檢測腫瘤細胞突變DNA的手段，可有效應用于腫瘤的早期篩查。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)可以通過檢測患者外周血樣對進入外周血循環(huán)的腫瘤組織核酸進行分析，相對于傳統(tǒng)的PCR檢測方法，有更高的靈敏度，可以更好的勝任稀有變異檢測的工作，實驗數(shù)據(jù)證實微滴式數(shù)字PCR可以實現(xiàn)0.001%的突變頻率篩查。   

腫瘤病理學輔助診斷   

微滴式數(shù)字PCR的一個主要優(yōu)勢是所需樣本量很低，這對于臨床來說特別有意義，尤其是當病理樣本太少時，DDPCR可以幫助檢測突變，來輔助診斷對藥物的敏感性。另外在腫瘤均質(zhì)細胞內(nèi)檢測單一突變相對簡單，但是如果在異質(zhì)細胞內(nèi)，在僅存有少量攜帶突變腫瘤細胞的情況下，突變的特定等位基因是否可以被準確檢測到，直接影響到靶向治療是否有效。微滴式數(shù)字PCR 在進行突變/稀有變異檢測中發(fā)揮著重要的作用，是臨床腫瘤樣本靶向藥物分子檢測的*。   

圖1.在外周血中檢測肺癌患者不同濃度樣本的EGFR第21號外顯子的突變率   

腫瘤負荷的實時監(jiān)控   

微滴式數(shù)字PCR技術(shù)由于可以檢測外周血循環(huán)細胞中微量腫瘤細胞突變DNA，成為進行腫瘤負荷實時監(jiān)控的有效手段，判斷患者體內(nèi)腫瘤細胞負荷更加科學、可靠、及時。   

 圖2.通過在外周血中檢測肺癌患者KRAS基因某一位點的突變率，來實時監(jiān)測患者體內(nèi)腫瘤細胞負荷   

藥物耐藥突變外周血監(jiān)控   

目前，許多腫瘤常規(guī)化療效果差，預后不良是困擾臨床的重要難題，而腫瘤多藥耐藥性則是腫瘤化療失敗的關(guān)鍵因素。經(jīng)治療后，殘存的腫瘤干細胞耐藥性形成，常導致對某些藥物治療敏感性降低，并引起腫瘤復發(fā)甚至轉(zhuǎn)移，因此，對藥物耐藥突變的篩選和監(jiān)控成為當今醫(yī)學界研究的熱點。