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逆轉錄酶（Reverse Transcriptase，簡稱RT酶）是一種能夠將RNA模板轉化為互補DNA（cDNA）的酶。在分子生物學研究中，逆轉錄酶的應用極為廣泛，特別是在分子診斷領域發(fā)揮著作用。通過逆轉錄過程，可以將病毒的RNA基因組轉換為cDNA，之后便可以利用如qPCR等技術對其進行擴增和檢測。這一特性使得對諸如艾滋病、甲型流感以及乙型流感這類RNA病毒進行準確診斷成為可能。
圖1. 逆轉錄流程示意圖
追求更快速、更靈敏且操作更為簡便的RT-qPCR分子診斷試劑已成為當前的主要發(fā)展趨勢。作為RT-qPCR過程中的關鍵原料之一，逆轉錄酶需要具備更快的逆轉錄速度、更高的合成產量以及更好的耐熱性能。為了獲得更適用于RT-qPCR的逆轉錄酶，翌圣生物在M-MLV的基礎上通過基因改造，開發(fā)出RNase H活性更低，熱穩(wěn)定性更高，持續(xù)合成能力更強的Hifair® 系列逆轉錄酶。
圖2.逆轉錄酶作用原理圖
翌圣Hifair®系列逆轉錄酶
目前翌圣有多種Hifair®系列逆轉錄酶，并且可提供各種劑型的產品，包含單酶、預混液，您可以根據實際需求進行選擇。下表羅列了翌圣不同逆轉錄酶的特點和推薦應用。
表1.翌圣逆轉錄酶選擇指南
產品名稱（貨號） | 產品特點 | 推薦應用 |
Hifair® III逆轉錄酶（11111ES） | 熱穩(wěn)定（高達65℃），適合復雜模板 | RT-LAMP |
Hifair® V逆轉錄酶（11300ES） | 兼容性強，速度快、合成產量高 | 一步法RT-PCR/qPCR |
Hifair® Ultra逆轉錄酶（14604ES） | 持續(xù)合成能力強，合成長度可達20 kb | RT-PCR/qPCR、RNA-seq、單細胞測序 |
注：以上所有的酶都有高濃度或無甘油版形式
下面重點介紹一款應用在RT-qPCR分子診斷試劑的逆轉錄酶：Hifair® V Reverse Transcriptase。該酶兼容性強，速度快、合成產量高，可耐受高達58℃的反應溫度，非常適合用于RT-qPCR分子診斷試劑的開發(fā)。
Hifair® V逆轉錄酶性能展示
可耐受58℃反應溫度，適合復雜RNA模板的逆轉錄
圖3.將Hifair® V Reverse Transcriptase及進口品牌T*的逆轉錄酶分別在55℃及58℃下孵育30min檢測殘余酶活。結果顯示Hifair® V Reverse Transcriptase在58℃下孵育30min仍能保持70%活性，遠超進口品牌。
應用于RT-qPCR檢出率優(yōu)于其他品牌，檢出范圍：1 pg-1 μg
圖4.以1 pg-1 μg（7個梯度）的293T細胞總RNA為模板，使用Hifair® V one-step RT-gDNA digestion SuperMix for qPCR(Cat#11142)、V*、T*進行逆轉錄，得到的cDNA進行qPCR定量分析。結果顯示，11142ES靈敏度可達1 pg，檢出率優(yōu)于競品。
翌圣逆轉錄酶突變體庫
翌圣生物利用其ZymeEditor™雙向分子酶理性設計與定向進化平臺，持續(xù)推進逆轉錄酶的進化研究。至今，我們已經篩選出多種在不同應用場景下表現(xiàn)的逆轉錄酶突變體，能夠全面滿足不同客戶群體在多樣化應用領域的需求。
表2.翌圣逆轉錄酶突變體選擇指南
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