20121ES60 NP-40 Lysis Buffer NP-40裂解液
參考價 | ¥228.00 |
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌Yeasen/翌圣生物
- 型號20121ES60
- 所在地上海市
- 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
- 更新時間2024/9/22 10:32:50
- 訪問次數(shù) 143
100 mL | 228.00元 | 999 件可售 |
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
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產(chǎn)品簡介
NP-40裂解液(NP-40 Lysis Buffer)是一種比較溫和的細胞組織裂解液。含有sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等多種抑制劑,可以有效抑制蛋白降解。NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的PAGE、Western、免疫沉淀(immunol precipitation,IP)、免疫共沉淀(Co-IP)和ELISA等實驗。
產(chǎn)品信息
貨號 | 20121ES60 |
規(guī)格 | 100 mL |
儲存條件
-25~-15℃保存,有效期1年。盡量避免反復凍融,建議分裝后使用。
使用說明
(一) 細胞樣品
1. 融解NP-40裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。
2. 貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液清洗細胞一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸動物細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。植物細胞宜在冰上裂解2-10分鐘。
懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成5×105-1×106個細胞/管,然后再裂解。因為大團的細胞較難裂解充分,而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸,相對比較容易裂解充分。
充分裂解后,10000-14000 g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150 μL裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200 μL 或250 μL。每100萬動物細胞用100 μL本產(chǎn)品裂解后獲得的上清,其蛋白濃度約為2-4 mg/ml,不同細胞有所不同。
(二)組織樣品:
1. 把 切成細小的碎片。
2. 融解NP-40裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的最終濃度為1 mM。
3. 按照每20 mg組織加入150-250 μL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000 g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細小,可以適當剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得充分。
注意事項
需自備PMSF(Cat#20104ES),裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
用NP-40裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定其蛋白濃度(Cat#20201ES/20200ES)。 由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
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本產(chǎn)品僅作科研用途。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。