產品介紹

DAPI，也稱DAPI dihydrochloride，是一種常用的核酸染料，和EB(ethidium bromide)相比，DAPI對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。盡管DAPI不能通過活細胞膜，但可以通過提高濃度使之進入活細胞。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，Microplasm DNA以及染色體DNA。

技術原理

DAPI可以和雙鏈DNA富含AT序列的小溝結合，產生比自身強20多倍的藍色熒光。DAPI也可對RNA進行染色，染色機理是其可以選擇性嵌入“AU序列”并發(fā)出熒光。相比DAPI-dsDNA（Ex/Em=358 nm/461 nm），DAPI-RNA具有較長的最大發(fā)射波長（500 nm），其熒光亮度僅有DAPI-dsDNA的20%。

運輸與保存方法

冰袋運輸，5 mg/mL的DAPI儲存液于-20oC避光保存，1年有效。

使用方法

1、用雙蒸水或PBS稀釋母液，配制成所需要的工作的濃度（0.5-10 μg/mL）。

2、對于固定的細胞或組織樣品，固定后，適當洗滌去除固定劑。DAPI染色通常在其他染色的最后進行。如果不需要進行其它染色，則直接進行DAPI 染色。

3、細胞培養(yǎng)物中加入適量DAPI染色液，約1/10細胞培養(yǎng)基體積，必須充分覆蓋住待染色的樣品。通常對于六孔板一個孔需加入1 mL染色液，對于96孔板一個孔需加入100 μL染色液。 

4、在37℃培養(yǎng)細胞 10～20 分鐘。

5、用 PBS或合適的緩沖液洗細胞兩次。

6、直接在熒光顯微鏡下觀察或封片后熒光顯微鏡下觀察。激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長460 nm。

不同DAPI染色的結果

注意事項

1）DAPI對人體有一定刺激性，請注意適當防護。

2）熒光染料都存在淬滅的問題，建議染色后盡量當天完成檢測。

3）為減緩熒光淬滅可以使用抗熒光淬滅封片液。

4）低濃度的DAPI不容易穿透細胞膜。

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