產(chǎn)品介紹

阿爾瑪藍(lán)（Alamar Blue）是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸亮度變化和熒光信號。這是一種安全無毒的染料，可用于細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的定量分析以及細(xì)胞因子生物測定和體外細(xì)胞毒性研究，能有效測定動物、真菌和細(xì)菌細(xì)胞的天然代謝活性。

技術(shù)原理

Alamar Blue在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，反映所研究的細(xì)胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細(xì)胞和細(xì)菌的代謝活動。

這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。在細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低?？梢杂闷胀ǚ止夤舛扔嫽驘晒夤舛扔嫏z測，其激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。

產(chǎn)品特點(diǎn)

本品可廣泛地用于細(xì)胞增殖代謝，藥物的細(xì)胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。 與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，Alamar Blue具有更多的優(yōu)勢。Alamar Blue采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于Alamar Blue對細(xì)胞無毒、無害，不影響細(xì)胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。 

運(yùn)輸與保存方法 

冰袋運(yùn)輸。4oC避光保存，一年有效。

使用方法

一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定最佳孵育時間和細(xì)胞數(shù)量）

1、每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對數(shù)生長期細(xì)胞），對細(xì)胞計數(shù)。按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個細(xì)胞濃度梯度，每個濃度建議3-6個復(fù)孔。

注：設(shè)置陰性對照：細(xì)胞培養(yǎng)基中不加入細(xì)胞；陽性對照：100微升100%還原型Alamar Blue（不含細(xì)胞）。

2、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

3、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（37℃,5% CO2）一定時間。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

4、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

二、細(xì)胞毒性和細(xì)胞增殖檢測

1、每孔加入100微升細(xì)胞懸液（對數(shù)生長期細(xì)胞），對細(xì)胞計數(shù)。建議細(xì)胞數(shù)量為104/mL，具體每孔需要的細(xì)胞數(shù)量，需根據(jù)細(xì)胞類型決定。

2、 細(xì)胞中加入待檢測藥物，為檢測藥物對細(xì)胞增殖的作用，請設(shè)置合適的對照組，包括刺激細(xì)胞和非刺激細(xì)胞。

3、混勻，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）一段時間。

4、每孔加入10微升Alamar Blue。陽性對照孔中加入10微升無菌的超純水。

5、放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)孵育（37℃，5% CO2）4 - 8 h，最佳孵育時間取決于細(xì)胞類型。培養(yǎng)基的顏色由靛青藍(lán)開始變成粉紅色就可以進(jìn)入下一步。

6、推薦用熒光分光光度計檢測，激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。

7、普通分光光度計在570nm測定吸光度，參考波長600 nm。也可用570/630 nm和540/600 nm替代。

常見問題

Q：還原率的計算其中一步是還原型陽性對照熒光值減去陰性對照的熒光值，減去后成負(fù)值？

A：陽性對照的值比實(shí)驗(yàn)組高，需要重新制備。陽性對照是100%還原的，高溫使得阿爾瑪藍(lán)變成還原態(tài)的。

Q：Alamar Blue 阿爾瑪藍(lán),使用是需要高壓滅菌是吧?

A: 阿爾瑪藍(lán)本身是無菌的。只有制備還原型的時候需要滅菌。不能對濃縮的Alamar Blue高壓滅菌。

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