實(shí)驗(yàn)室組織細(xì)胞破碎方法(超聲波細(xì)胞粉碎機(jī))
實(shí)驗(yàn)室對(duì)組織細(xì)胞的破碎方法很多,有機(jī)械方法、物理方法、化學(xué)方法和生物化學(xué)方法等。
在破碎前,材料常需要預(yù)處理,如動(dòng)物材料要除去與實(shí)驗(yàn)無關(guān)甚至有妨礙的結(jié)締組織,脂肪組織和血污等,植物種子需要除殼,微生物材料需將菌體和發(fā)酵液成分分開等。不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模、不同實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)要求,使用的破碎方法和條件也不同。一些堅(jiān)韌組織,如肌肉、植物的根莖等,常需要強(qiáng)烈的攪拌或研磨作用,才能把其組織細(xì)胞破壞。而比較柔軟的組織如肝、腦等,用普通的玻璃勻漿器即可達(dá)到破壞細(xì)胞的目的。對(duì)同一實(shí)驗(yàn)材料,由于實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ螅┑牟煌?,采用的破碎方式也存在yi定差異,如提取中的核酸和提取其中的核苷酸,前者保持溫和的條件,以保持分子的完整性;后者可采用強(qiáng)烈手段。
1. 機(jī)械法
主要通過機(jī)械切力的作用使組織細(xì)胞破碎的方法,常用的器械有組織搗碎機(jī)、勻漿器、研缽和研磨、壓榨器等。
1)組織搗碎機(jī) 一般用于動(dòng)物組織、植物肉質(zhì)種子、柔嫩的葉芽等,轉(zhuǎn)速可高達(dá)10000rpm/M以上。由于旋轉(zhuǎn)刀片的機(jī)械切力很大,制備一些較大分子如核酸則很少使用。
2)勻漿器 勻漿器的研缽磨球和玻璃管內(nèi)壁之間間隙保持在之幾毫米距離,破碎細(xì)胞的程度比組織搗碎機(jī)高。制作勻漿器的材料,除玻璃外,還可以用硬質(zhì)塑料、不銹鋼、人造熒光樹脂等。
3)研缽 多用于細(xì)菌或其他堅(jiān)硬植物材料,研磨時(shí)常加入少量石英砂,玻璃粉或其他研磨劑,以提高研磨效果。
4)細(xì)菌磨 是一種改良了的研磨器,比研缽具有更大的研磨面積,而且低部有出口。操作時(shí)先把細(xì)菌和研磨粉調(diào)成糊狀,每次加入一小勺,研磨20-30秒即可將細(xì)菌細(xì)胞磨碎。
2. 物理法
主要通過各種物理因素使組織細(xì)胞破碎的方法。在生化制備中常用的方法有:
1)反復(fù)凍溶法 先將樣品深冷至-15---20度使之凍固,再緩慢的融化,反復(fù)多次,多用于動(dòng)物性材料。
2)急熱驟冷法 將材料投入沸水中,維持85-90分鐘,至水浴中急速冷卻,此法可用于細(xì)菌及病毒材料。
3)超聲波處理 頻率一般選在10KC至200KC,功率200-500瓦范圍,處理時(shí)間有數(shù)分鐘至數(shù)鐘不等,處理過程中注意冷卻。此法多用于微生物材料。
3.化學(xué)及生物化學(xué)法
有自溶法,酶解法和表面活性劑法等。
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