皖儀科技液相色譜對(duì)2025年版《中國(guó)藥典》黃芪和檳榔公示稿中赭曲霉毒素A的檢測(cè)
前言
在國(guó)家藥典委修訂的2025年版《中國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)草案中,黃芪和檳榔標(biāo)準(zhǔn)草案中增訂了赭曲霉毒素A的檢查項(xiàng)。在修訂草案的公示稿中對(duì)于供試品的制備,與2020年版《中國(guó)藥典》2351赭曲霉毒素A測(cè)定法中供試品溶液的制備有較大差異,差異如下:
本次實(shí)驗(yàn)參考了2025年版《中國(guó)藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿,采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000,目標(biāo)峰周圍無(wú)雜峰,滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。對(duì)照品赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%,峰面積重復(fù)性為0.421%,重復(fù)性較好。曲線測(cè)試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法的要求。
關(guān)鍵詞:黃芪;檳榔;高效液相色譜法;熒光檢測(cè)器;赭曲霉毒素A。
1 實(shí)驗(yàn)方法
1.1 儀器配置
1.2實(shí)驗(yàn)材料及輔助設(shè)備
乙腈:色譜純;
甲醇:色譜純;
冰乙酸:優(yōu)級(jí)純;
赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品:100mg/L;
聚山梨酯20:分析純;
氯化鈉:優(yōu)級(jí)純;
磷酸氫二鈉:優(yōu)級(jí)純;
磷酸二氫鉀:優(yōu)級(jí)純;
氯化鉀:優(yōu)級(jí)純;
鹽酸:優(yōu)級(jí)純;
赭曲霉毒素A免疫親和柱;
離心機(jī)。
1.3測(cè)試條件
1.4溶液配制
1.4.1 PBS緩沖液
稱取氯化鈉8.0g、磷酸氫二鈉1.2g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鉀0.2g,加水990mL使溶解,用鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0,加水稀釋至1000mL,即得。
1.4.2 聚山梨酯20 PBS緩沖液
取聚山梨酯20 1.0mL,加PBS緩沖液稀釋至1000mL,即得。
1.4.3對(duì)照品溶液
精密量取赭曲霉毒素A對(duì)照品適量,用甲醇制成濃度為每1mL含2.5ng的溶液,即得。
1.4.4供試品溶液的制備
取供試品粉末約3g,精密稱定,置于均質(zhì)瓶中,加入氯化鈉3g,精密加入70%甲醇60mL,離心10分鐘(離心速度8000r/min),精密量取上清液5mL,置于50mL量瓶中,用PBS緩沖液稀釋至刻度,搖勻,離心15分鐘(離心速度8000r/min),精密量取上清液20mL,通過(guò)免疫親和柱,流速每分鐘3mL,用聚山梨酯20 PBS緩沖液10mL沖洗,棄去洗脫液,使空氣進(jìn)入柱子,再用水10mL洗脫,流速每分鐘6mL,棄去洗脫液,使空氣進(jìn)入柱子,將水?dāng)D出柱子,再用甲醇1.5mL洗脫,收集洗脫液,置2mL量瓶中,并用水稀釋至刻度。
2 結(jié)果與討論
2.1 系統(tǒng)適用性
說(shuō)明:由上述譜圖可見(jiàn),理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000,目標(biāo)峰周圍無(wú)雜峰,滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。
2.2 對(duì)照品重復(fù)性測(cè)試
說(shuō)明:由上表數(shù)據(jù)可知,赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%,峰面積重復(fù)性為0.421%,重復(fù)性較好,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
2.3 曲線測(cè)試
說(shuō)明:赭曲霉毒素A對(duì)照品濃度為2.5μg/L,分別進(jìn)樣5μL,10μL,15μL,20μL,25μL。由上圖數(shù)據(jù)可知,曲線方程R值為0.999以上,滿足實(shí)驗(yàn)要求。
2.4 檢出限測(cè)試
說(shuō)明:由上表數(shù)據(jù)可知,赭曲霉毒素A濃度為2.5μg/L,進(jìn)樣量5μL,可得進(jìn)樣質(zhì)量為12.5ng。由三倍信噪比為檢出限可得赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。滿足實(shí)驗(yàn)要求。
2.5 黃芪和檳榔測(cè)試結(jié)果
說(shuō)明:由黃芪加標(biāo)譜圖中可以表明,黃芪譜圖中的峰不是赭曲霉毒素A,黃芪和檳榔中未檢測(cè)出赭曲霉毒素A,且在空白實(shí)驗(yàn)及空白前處理實(shí)驗(yàn)也未檢測(cè)出未知峰,黃芪和檳榔譜圖中的未知峰應(yīng)是樣品中未知物。
2.6 注意事項(xiàng)
1. 免疫親和柱需在2-8℃冰箱中保存,不可冷凍;
2. 赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)品需在-20±5℃下保存。
3 結(jié)論
本次實(shí)驗(yàn)參考了2025年版《中國(guó)藥典》黃芪和檳榔的修訂草案公示稿,采用皖儀科技高效液相色譜儀LC3200系列配置熒光檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,理論塔板數(shù)以赭曲霉毒素A峰算遠(yuǎn)高于藥典要求4000,目標(biāo)峰周圍無(wú)雜峰,滿足系統(tǒng)適用性試驗(yàn)要求。對(duì)照品赭曲霉毒素A保留時(shí)間重復(fù)性RSD為0.075%,峰面積重復(fù)性為0.421%,重復(fù)性較好。曲線測(cè)試R值在0.999以上。赭曲霉毒素A的檢出限為2.366ng。以上數(shù)據(jù)均滿足藥典方法的要求。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問(wèn)題,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。