凝固血液DNA提取試劑盒
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PCR原理
DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解旋成單鏈,在DNA聚合酶的參與下,根據(jù)堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。在實驗中發(fā)現(xiàn),DNA在高溫時也可以發(fā)生變性解鏈,當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此,通過溫度變化控制DNA的變性和復性,加入設計引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。
但是,DNA聚合酶在高溫時會失活,因此,每次循環(huán)都得加入新的DNA聚合酶,不僅操作煩瑣,而且價格昂貴,制約了PCR技術的應用和發(fā)展。
發(fā)現(xiàn)耐熱DNA聚合酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義,該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活,不需要每個循環(huán)加酶,使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本,PCR技術得以大 taq酶[1]量應用,并逐步應用于臨床。
PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應步驟構成:①模板DNA的變性:模板DNA經加熱至93℃左右一定時間后,使模板DNA雙鏈或經PCR擴增形成的雙鏈DNA解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應作準備;②模板DNA與引物的退火(復性):模板DNA經加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板DNA單鏈的互補序列配對結合;③引物的延伸:DNA模板--引物結合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP為反應原料,靶序列為模板,按堿基互補配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板DNA鏈互補的半保留復制鏈,重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘,2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。
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基準試劑
溴化鋅/無水溴化鋅/ZinSF bromide SFSF,98% 7699-45-8 RT,避光
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電子真空涂漠
植酸/肌醇六磷酸/環(huán)己六醇磷酸酯/肌醇六磷酸酯/環(huán)已六醇六磷酸酯/SFhytiSF aSFid BR,70% 83-86-3 RT
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草酸/二水合乙二酸/蓚酸/OxaliSF aSFid dihydrate GR,99.8% 6153-56-6 RT
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基準試劑
丹寧酸/鞣酸/單寧酸/炭尼酸/沒食子鞣酸/鞣質/沒食子鞣酸/柔酸/單寧/二倍酸/落葉松栲膠/楓香木/TanniSF aSFid AR 1401-55-4 RT,避光
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乙炔-1,2-二羧酸/丁炔二酸/乙炔二羧酸/2-丁炔二酸/2-ButynedioiSF aSFid BR,97% 142-45-0 RT
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