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ELISPOT技術(shù)原理和技術(shù)特點(diǎn)
ELISPOT全名為酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)，英文：Enzyme-linkedImmunospotAssay。它結(jié)合了細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)與酶聯(lián)免疫吸附技術(shù)（即ELISA技術(shù)），能夠在單細(xì)胞水平檢測(cè)細(xì)胞因子的分泌情況。其技術(shù)原理，一句話概括就是：用抗體捕獲培養(yǎng)中的細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，并以酶聯(lián)斑點(diǎn)顯色的方式將其表現(xiàn)出來（SedgwickJD2005）。該技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞因子具有三大優(yōu)點(diǎn)：其一，靈敏度高。在一百萬個(gè)陰性細(xì)胞中只要有一個(gè)分泌細(xì)胞因子的陽(yáng)性細(xì)胞即可被檢測(cè)出來。這是目前為止，zui為靈敏的檢測(cè)技術(shù)，靈敏度比傳 -
運(yùn)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞應(yīng)注意的問題
運(yùn)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞應(yīng)注意的問題制作組織勻漿或細(xì)胞懸液，用熒光染料染色，則可以用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)不同DNA含量或倍數(shù)的細(xì)胞數(shù)。例如，在睪丸組織中，精子細(xì)胞為單倍體細(xì)胞，精原細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、Leydig細(xì)胞和其他非生精細(xì)胞為雙倍體細(xì)胞，初級(jí)精母細(xì)胞以及處于分裂期的精原細(xì)胞和非生精細(xì)胞為四倍體細(xì)胞。因此，運(yùn)用流式細(xì)胞儀測(cè)定睪丸組織各級(jí)生精細(xì)胞DNA倍體的變化，可以間接判斷不同生精細(xì)胞數(shù)目相對(duì)比例變化的趨勢(shì)。但是，利用這些結(jié)果得出結(jié)論時(shí)一定要謹(jǐn)慎。例如，單倍體細(xì)胞數(shù)所占百分比下降可能說明精子 -
流式細(xì)胞儀的工作原理流式細(xì)胞儀主要由四部分組成：流動(dòng)室和液流系統(tǒng)，激光源和光學(xué)系統(tǒng)，光電管和檢測(cè)系統(tǒng)，計(jì)算機(jī)和分析系統(tǒng)。四大系統(tǒng)共同完成信號(hào)的產(chǎn)生、轉(zhuǎn)換和傳輸任務(wù)。檢測(cè)時(shí)將待測(cè)細(xì)胞或微粒制成細(xì)胞懸液，進(jìn)行熒光染色后加入樣品管中。以一定壓力將待測(cè)樣品壓人流動(dòng)室，在高壓下磷酸緩沖液（鞘液）從鞘液管噴出，鞘液管人口方向與待測(cè)樣品流成一定角度，這樣，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動(dòng)，組成一個(gè)圓形流束（鞘流），待測(cè)細(xì)胞在鞘液包繞下單行排列，依次通過檢測(cè)區(qū)。流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦后的光束，垂直
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細(xì)胞培養(yǎng)小技巧---操縱時(shí)間的藝術(shù)
眾所周之，每次給細(xì)胞換液體的時(shí)候都需要把細(xì)胞拿出來，然而就這一拿，“學(xué)問”就在里面：我們要盡量縮短細(xì)胞在培養(yǎng)箱外面的時(shí)間，盡量增加細(xì)胞在zui適環(huán)境中的時(shí)間。換液流程：1.將培養(yǎng)基放在37度水浴鍋內(nèi)，準(zhǔn)備好廢液缸、吸管、酒精棉球，干棉球，在超凈臺(tái)上，將照相機(jī)放在顯微鏡旁邊，然后開超靜臺(tái)紫外，開培養(yǎng)室紫外，開培養(yǎng)室風(fēng)機(jī)，空調(diào)。2.30min后，進(jìn)培養(yǎng)室。3.關(guān)紫外，開超凈臺(tái)風(fēng)機(jī)，酒精擦手，關(guān)水浴鍋，將水浴鍋內(nèi)的培養(yǎng)基放在超凈臺(tái)上，用干棉球擦干，然后開蓋，準(zhǔn)備好吸管。4.這個(gè)時(shí)候再?gòu)呐囵B(yǎng)箱里將培養(yǎng)瓶 -
細(xì)胞培養(yǎng)之無菌技術(shù)注意事項(xiàng)匯總
簡(jiǎn)介細(xì)胞培養(yǎng)的成功很大程度上取決于保護(hù)細(xì)胞免受細(xì)菌、真菌和病毒等微生物的污染。非無菌物品、培養(yǎng)基和試劑、帶有微生物的空氣顆粒、不干凈的培養(yǎng)箱和污染的工作臺(tái)面均是導(dǎo)致微生物污染的來源。無菌技術(shù)的作用是在環(huán)境微生物與無菌的細(xì)胞培養(yǎng)物之間形成一道屏障，它通過一套操作流程來降低培養(yǎng)物被上述污染源污染的可能。無菌技術(shù)的組成要素包括：無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。無菌工作區(qū)域zui為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì)的減少空氣顆粒和氣體揮發(fā)（例如：灰塵、芽孢、皮屑、噴嚏）污染的方法就是采用細(xì)胞培養(yǎng)通風(fēng) -
體外細(xì)胞的原代培養(yǎng)、傳代培養(yǎng)、凍存和復(fù)蘇
一、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞培養(yǎng)可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)。直接從體內(nèi)獲取的組織細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)為原代培養(yǎng)；當(dāng)原代培養(yǎng)的細(xì)胞增殖達(dá)到一定密度后，則需要做再培養(yǎng)，即將培養(yǎng)的細(xì)胞分散后，從一個(gè)容器以1：2或其他比率轉(zhuǎn)移到另一個(gè)或幾個(gè)容器中擴(kuò)大培養(yǎng)，為傳代培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)的累積次數(shù)就是細(xì)胞的代數(shù)。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以zui大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或DMSO作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少 -
細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、掌屋凋亡細(xì)胞的形態(tài)特征2、學(xué)會(huì)用熒光探針對(duì)細(xì)胞進(jìn)行雙標(biāo)記來檢測(cè)正?；罴?xì)胞、凋亡細(xì)胞和壞死細(xì)胞的方法二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞死亡根據(jù)其性質(zhì)、起源及生物學(xué)意義區(qū)分為凋亡和壞死兩種不同類型。凋亡普遍存在于生命界，在生物個(gè)體和生存中起著非常重要的作用。它是細(xì)胞在一定生理?xiàng)l件下一系列順序發(fā)生事件的組合，是細(xì)胞遵循一定規(guī)律自己結(jié)束生命的自主控制過程。細(xì)胞凋亡具有可鑒別的形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)特征。在形態(tài)上可見凋亡細(xì)胞與周圍細(xì)胞脫離接觸，細(xì)胞變園，細(xì)胞膜向內(nèi)皺縮、胞漿濃縮、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張、細(xì)胞核固縮破裂呈團(tuán)塊狀
